青天葵分枝發(fā)育相關基因NfLs的克隆與表達分析.pdf

1、廣州中醫(yī)藥大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明： 所呈交的學位論文，是個人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經特別加以注明引用的內容外，本論文不含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明并致謝。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學馘文儲簽名莘遞企日期： 2 0 1 4 年 6 月 3 日關于學位論文使用授權的聲明本人完全了解廣州中醫(yī)藥大學有關保

2、留使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部門機構送交論文的復印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權廣州中醫(yī)藥大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復印手段保存和匯編本學位論文。( 保密論文在解密后應遵守此規(guī)定)論文導師簽名——6 月 3 日青天葵分枝發(fā)育相關基因U f L s 的克隆與表達分析專業(yè)：中藥學碩士研究生：梁凌玲導師：何瑞研究員摘 要分枝是植物為了適應環(huán)境而表現出的生物性狀

3、，分枝的多少直接影響植物的生物量和結實量。由于頂端優(yōu)勢的存在，側芽的生長被抑制。研究表明，植物的分枝發(fā)育受到多種植物激素的調節(jié)。相關分枝基因在不同物種中的保守性，使其在藥用植物中的克隆研究成為可能，如蘭科植物石斛蘭中，克隆得到抑制分生組織的生長、促進莖尖分生組織的形成和早熟開花的D O H l 。研究植物分枝相關基因，不僅可以增加對植物發(fā)育及其機理的了解，還可以為獲得多分枝植株，增加藥用植物的產量，緩解某些藥用植物資源短缺問題，如瀕危的

4、嶺南道地藥材青天葵等提供理論基礎?！稄V東省中藥材標準》收錄的青天葵來源于蘭科植物毛唇芋蘭[ N e r v i l i af o r d i i( H a n c e ) S c h l t r ．】的干燥全草。主要分布于兩廣、海南等地區(qū)。具有清熱解毒、散瘀止痛、潤肺止咳等功效。主要用于小兒呼吸道疾病、小兒疳積、跌打損傷等。由于青天葵本身繁殖系數較低，市場需求量大，加上人類的過度采挖，其野生資源瀕臨滅絕，而人工栽培遠遠不能滿足市場需求，

5、因此擴大青天葵的藥用資源亟不可待。本論文通過研究從前期建立的青天葵轉錄組數據中發(fā)掘到的一個分枝發(fā)育相關基因N f L s ，期望為打破青天葵正常情況下每個球莖只長一片葉子的現狀奠定基礎。主要研究內容包括：( 1 ) 為了篩選適合青天葵葉片總R N A 的提取方法，本文采用C T A B 法、S D S法、R N e a s y P l a n tM i n iK i t 法、R N A i s oP l u s 法、R N A i s

6、of o rP o l y s a c c h a r i d e —r i c hP l a n tT i s s u e 法5 種方法，并結合4 類抽提試劑，分別提取青天葵葉片總R N A ，得到適合青天葵葉片總R N A 的提取方法：R N A i S O P l u s 法。( 2 ) 基于青天葵轉錄組U n i g e n e s 數據庫，篩選青天葵分枝發(fā)育相關的U n i g e n e s ，其中U n i g e n e

7、 3 7 9 4 8 與番茄促進分枝的基因厶同源。以U n i g e n e 3 7 9 4 8 序列為依據，采用R A C E 技術獲得青天葵分枝發(fā)育相關基因N f L sc D N A 全長序列，該序列包含了1 1 9 1 b p 的開放閱讀框，共編碼3 9 6 個氨基酸。利用N C B IB L A S T P 功能對N f L s 的蛋白功能域進行預測，其歸屬于G R A S 家族。采用s e q u i n 軟件向G e n