香菇子實體發(fā)育相關基因的克隆及分析.pdf

1、香菇(Lentinulaedodes)子實體的形成是香菇整個生活史中最復雜也是最重要的發(fā)育過程，需要環(huán)境、遺傳、生理等多個因素相互作用。研究子實體發(fā)育相關基因一直是食用菌領域中個重要的研究內(nèi)容。正常的香菇子實體分化形成菌蓋、菌褶和菌柄。
　　 香菇球形子實體是在湖北省隨縣三里崗鎮(zhèn)發(fā)現(xiàn)的香菇正常子實體中的變異類型，整個子實體成球形，菌蓋不開傘，菌柄不伸長，菌褶未見分化。經(jīng)過組織分離獲得純培養(yǎng)菌種，進行再次栽培試驗，仍然長出球形子實

2、體。本試驗以子實體為球形的香菇菌株為材料，利用DDRT-PCR技術克隆及分析了該菌株在菌絲、原基、子實體三個階段基因。試驗采用3條錨定引物和26條隨機引物進行PCR擴增，其中只有14條隨機引物可以擴增出重復性好、數(shù)量多且清晰地條帶，擴增結(jié)果以PA和Pc為錨定引物反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA模板最好。得到穩(wěn)定的差異條帶41條，經(jīng)過反向Northern點雜交驗證出陽性差異片段17條，假陽性率為58.54％?？寺y序后在Genbank數(shù)據(jù)庫中進行BL

3、AST同源分析，17條差異片段中有7條片段與已知的基因序列和蛋白序列具有較高的相似性。
　　 差異片段GP20-540與香菇LephrA基因AB279630.1具有98％的相似性，推測其可能是編碼藍光受體A的基因，參與類胡蘿卜素的生成、生物鐘的重設等功能；差異片段APlo-302編碼的蛋白與泉古菌(unculturedcrenarchaeote)45-H-12歸位內(nèi)切酶I-ApelI具有38％的相似性，推測其可能和蛋白質(zhì)剪接相關

4、；差異片段CP16-324編碼的蛋白與土曲霉(Aspergillusterreus)天冬氨酸激酶具有43％的相似性，推測其可能編碼天冬氨酸激酶，參與賴氨酸的生物合成；差異片段CP18-394編碼的蛋白與煙曲霉(Aspergillusfumigatus)的熱激蛋白90輔助分子伴侶序列具有41％的相似性，推測其具有抗逆以及作為分子伴侶維持蛋白穩(wěn)定和激酶活性；差異片段GP7-502編碼的蛋白與雙色蠟蘑(Laccariabicolor)的糖苷水

5、解酶家族2蛋白具有50％的相似性，推測其可能和糖代謝有關；差異片段CP20-321編碼的蛋白與靈芝(Ganodermalucidum)的金屬硫蛋白具有54％的相似性，推測其可能在重金屬解毒、金屬離子運輸及動態(tài)平衡的維持、離子代謝以及活性氧的清除等方面起作用；差異片段AP2l-479編碼的蛋白與灰蓋鬼傘(Coprinopsiscinerea)的假定蛋白CClG-_01848具有60％的相似性，但該蛋白的具體功能有待研究。進一步比較香菇正常