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文檔簡(jiǎn)介
1、向日葵是一種重要的油料作物,但在生產(chǎn)上經(jīng)常會(huì)受到多種病原菌的侵害,其中向日葵銹菌(Puccinia helian(r)hi Schw.)就是向日葵的主要病害之一,嚴(yán)重影響著向日葵的產(chǎn)量和含油量。為了找到向日葵抗銹病相關(guān)基因,本研究運(yùn)用同源序列克隆法,克隆獲得了向日葵抗病基因同源序列(HaRGA),并對(duì)其進(jìn)行分析。主要研究結(jié)果如下:
1.根據(jù)已知NBS-LRR型抗病基因的保守結(jié)構(gòu)域P-loop和GLPL設(shè)計(jì)筒并引物,以接菌的抗病
2、向日葵品種CM29葉片的cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增,分離克隆得到10個(gè)具有連續(xù)開(kāi)放閱讀框的RGA。對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析,這些HaRGA分屬于TIR-NBS-LRR和non-TIR-NBS-LRR兩種類型。對(duì)其氨基酸序列進(jìn)行多重序列比對(duì),結(jié)果顯示所獲得的HaRGA具有典型的NBS-LRR型抗病基因的保守結(jié)構(gòu)域即P-loop、kinase-2a、kinase-3a和GLPL等結(jié)構(gòu)域。同源性分析結(jié)果表明,HaRGA與已知的NBS-LRR型抗病基因
3、的同源性為18.1%~51.1%。根據(jù)以上結(jié)果推測(cè)它們可能與抗病功能基因具有密切聯(lián)系,已將這10個(gè)HaRGA提交到GenBank,登錄號(hào)為KJ620870~KJ620879。
2.運(yùn)用熒光定量PCR技術(shù),分析在向日葵銹菌侵染和不同激素(SA、ETH和H2O2)處理?xiàng)l件下HaRGA的表達(dá)情況。結(jié)果表明HaRGA1和HaRGA4在接種了向日葵銹菌后的抗病植株葉片內(nèi)表達(dá)量均呈現(xiàn)明顯上調(diào),而在未接種銹菌的對(duì)照葉片中HaRGA1和HaR
4、GA4的表達(dá)量變化并不明顯。在經(jīng)過(guò)激素處理后,HaRGA1和HaRGA4兩個(gè)基因的表達(dá)量都有明顯的變化,其中HaRGA1基因在受雙氧水處理后表達(dá)量很快就明顯上升,并持續(xù)大量表達(dá);HaRGA4基因?qū)τ谒畻钏岷鸵蚁┨幚淼捻憫?yīng)更加明顯,尤其是在水楊酸處理后該基因持續(xù)的顯著上調(diào)表達(dá),上述結(jié)果也顯示出得到的這兩個(gè)HaRGA基因?qū)Σ煌に赜兄@著響應(yīng)。以上結(jié)果說(shuō)明HaRGA1和HaRGA4可能參與了向日葵對(duì)銹菌的抗病反應(yīng),而且在不同的抗病途徑中起著
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