桃果實(shí)PpCuZnSOD、PpEXP和PpPIP1基因的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、MolecularCloning1H’r’andExpresslon0tPpCuZnSODPpEXPandPpPIP1GenesofPrunuspersicaFruitThesissubmittedtongdaoAgrkulturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyWuJunshuai(DepartmentofAgronomy)Su

2、pervisor：LiPeihuanDuanYanxinQingdaoChmaJune，2013青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要摘要jtJor究以硬肉桃新品種‘雙久紅’為試材，以常規(guī)品種‘川中島白桃’為對(duì)照，通過(guò)對(duì)不同時(shí)期及不同外源激素處理的果實(shí)硬度及乙烯釋放量的研究和桃果實(shí)PpCuZnSODeprⅨP和助P伊』基因的克隆與表達(dá)分析，旨在探清硬肉桃果實(shí)成熟后變軟慢的分子機(jī)制，為桃新品種的選育和推廣，全面提高桃樹(shù)栽培的經(jīng)濟(jì)效益提供理論依據(jù)

3、。試驗(yàn)研究結(jié)果如下：乙烯弄J(50mg／L)、NAA(50mg&)和ABA(50mg／L)3種外源激素處理能促進(jìn)‘雙久紅’果實(shí)的軟化，而在‘川中島白桃’果實(shí)中只有乙烯利和NAA作用較明顯；乙烯利和ABA處理促進(jìn)了‘川中島白桃’乙烯釋放高峰提前到來(lái)，NAA處理則使峰值增大，在‘雙久紅’中乙烯利和NAA提高了乙烯的釋放量，而ABA卻完全抑制了乙烯的釋放。本試驗(yàn)獲得了全長(zhǎng)665bp，編碼152個(gè)氨基酸的桃果實(shí)銅鋅超氧化物歧化酶基因PpCuZn

4、SOD全長(zhǎng)cDNA序列(GenBank登錄號(hào)：JX217743)，在此基礎(chǔ)上，成功構(gòu)建了該基因的原核表達(dá)載體pET32a()PpCuZnSOD，并在大腸桿菌中得到高效表達(dá)，層析純化后獲得活性為523103U／nag，pr0的CuZnSOD酶。熒光定量RTPCR結(jié)果表明：成熟前后20d過(guò)程中PpCuZnSOD基因在成熟后表達(dá)量高于成熟前，且在‘雙久紅’中的表達(dá)豐度顯著高于‘JIl中島白桃’的，該基因組織特異性不顯著；在‘J|l中島白桃’中

5、，NAA處理在前期有基因表達(dá)高峰，乙烯利處理的高峰出現(xiàn)在后期且高于NAA處理的，ABA則明顯抑制了該基因的表達(dá)，在‘雙久紅’中，對(duì)基因表達(dá)影響最大的乙烯利處理，其次為NAA處理，ABA處理無(wú)顯著影響。獲得了全長(zhǎng)1142bp，編碼252個(gè)氨基酸的桃果實(shí)擴(kuò)展蛋白基因ep戤7的全長(zhǎng)cDNA序列，在此基礎(chǔ)上，成功構(gòu)建了該基因的原核表達(dá)載體pET32a()epEXe，并在大腸桿菌中得到表達(dá)。熒光定量RT—PCR結(jié)果表明：成熟期前后PpF_XP基因

6、出現(xiàn)兩個(gè)表達(dá)高峰，并且在幼果中的表達(dá)量高于其他組織器官；在‘川中島白桃’中，該基因表達(dá)逐漸下降，乙烯利處理能夠促進(jìn)基因表達(dá)，在‘雙久紅’中，乙烯利和NAA能夠明顯促進(jìn)基因表達(dá)，ABA對(duì)該基因的表達(dá)無(wú)顯著影響。獲得了全長(zhǎng)1163bp，編碼290個(gè)氨基酸的桃果實(shí)水通道蛋白基因聊J全長(zhǎng)cDNA序列(GenBank登錄號(hào)：JX317646)，在此基礎(chǔ)上，成功構(gòu)建了該基因的原核表達(dá)載體pET32a()一印P口J。熒光定量RTPCR結(jié)果表明：成熟前