rhFGF8a高效表達載體的構(gòu)建及表達.pdf

1、成纖維細胞生長因子-8a(FibroblastGrowthFactor-8a，F(xiàn)GF8a)是成纖維細胞生長因子家族(FibroblastGrowthFactorFamily，F(xiàn)GFs家族)的第8個成員FGF8的a亞型，不僅是胚胎發(fā)育階段必需的細胞調(diào)節(jié)因子，更有多種生物學功能，能夠高效安全地促進組織損傷的修復，還在神經(jīng)干細胞培養(yǎng)過程中起重要的營養(yǎng)和誘導作用，因此有廣闊的臨床應用前景。重組人FGF8a(recombinanthumanfib

2、roblastgrowthfator-8a，rhFGF8a)是將人FGF8a基因經(jīng)過體外改造克隆后以生物工程菌表達得到的多肽。具有與天然FGF8a一致的活性。同時，與從天然動物組織中提取得FGf8a相比，更具有產(chǎn)量高、成本低，資源豐富的優(yōu)點?！　”疚乃U述的研究內(nèi)容，是rhFGF8a課題的一個部分，是廣州拜迪生物醫(yī)藥有限公司與新西蘭皇家科學院合作項目的子課題。主要目的是構(gòu)建新的高效表達rhFGf8a的載體，并選擇合適的表達宿主對其進行

3、表達，完成高效表達rhFGF8a的上游工作。　　本研究采用分子克隆技術(shù)、PCR擴增技術(shù)和DNA點突變技術(shù)，對rhFGF8a基因進行改造，再分別構(gòu)建到pET22b(+)和pET28a(+)兩質(zhì)粒上，以大腸桿菌Rosetta(DE3)和BL21(DE3)pLysS進行誘導表達，得到具有活性的rhFGF8a多肽。并且比較了新構(gòu)建的兩種質(zhì)粒與前期rhFGF8a課題研究所構(gòu)建的rhFGF8a原質(zhì)粒在兩種表達宿主中的表達量，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過基因改造后的r