番茄斑萎病毒(TSWV)dsRNA介導(dǎo)的分子免疫調(diào)控作用研究.pdf

1、番茄斑萎病毒(TSWV)是布尼亞病毒科(Bunuyaviridae)唯一侵染植物的番茄斑萎病毒屬(Tospovirus)的病毒之一。分布于世界各地,對許多作物及植物造成巨大經(jīng)濟(jì)損失,加之難以防治。所以本研究主要從dsRNA介導(dǎo)的分子免疫調(diào)控方面來研究防治該病毒的方法。
　　 根據(jù)已報(bào)道的TSWV基因序列,設(shè)計(jì)通用引物,通過RT-PCR擴(kuò)增了TSWV N基因和GN/GC基因的全長序列,并分別克隆到pGEM-T載體上,經(jīng)PCR篩選和

2、酶切鑒定與預(yù)期結(jié)果一致,對TSWVN基因和GN/GC基因進(jìn)行測序,經(jīng)過與GeneBank所登錄的其他株系比對后,結(jié)果表明,N基因核苷酸序列與來自South Korea的三個(gè)株系的N基因核苷酸序列的一致率最高,達(dá)99％；GN/GC基因核苷酸序列與來自Spain的兩個(gè)株系的GN/GC基因核苷酸序列一致率也高達(dá)99％。這說明:本研究中的材料在侵染寄主植物時(shí)發(fā)生了基因組重組的現(xiàn)象。
　　 根據(jù)克隆得到的TSWVN基因的序列,設(shè)計(jì)新的引物

3、,引入需要的限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)(AscI,SwaI,BamHI,SpeI),分別擴(kuò)增313bp和536bp的片段。用于構(gòu)建反向重復(fù)片段的植物表達(dá)載體。擴(kuò)增N基因反向片段的引物時(shí),在5'端引入限制性酶切位點(diǎn)SpeI,在3'端引入限制性酶切位點(diǎn)BamHI,擴(kuò)增N基因正向片段時(shí),在5'端引入限制性酶切位點(diǎn).AscI,在3'端引入限制性酶切位點(diǎn)SwaI,以中間載體pFGC1008自身的一段序列為內(nèi)含子,構(gòu)建反向重復(fù)dsRNA的載體,以pCAM