南豐蜜橘離體再生及生理生化特征研究.pdf

1、本研究以南豐蜜橘優(yōu)良品種的種子實生苗和成年態(tài)柑橘莖段為材料，通過組織培養(yǎng)的方法，建立了一套切實可行且高效的南豐蜜橘再生體系，并從內(nèi)源激素水平、過氧化物酶(POD)活性和過氧化物酶同工酶分析方面對培養(yǎng)物生長分化的有關(guān)生理生化機理做了研究。試驗結(jié)果如下：
　　 1.以南豐蜜橘種子實生苗的子葉、上胚軸、莖段、下胚軸為材料，在不同激素配比的改良MS基本培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽分化、繼代及生根培養(yǎng)。確定了誘導(dǎo)植株再生最適條件：(1

2、)愈傷組織誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基激素配比為MS+NAA2mg/L，愈傷誘導(dǎo)率93.02％；(2)誘導(dǎo)不定芽分化最適部位為上胚軸，培養(yǎng)基最適激素配比為MS+6-BA0.8 mg/L+NAA0.1 mg/L+D-泛酸鈣0.5 mg/L，不定芽分化率可達(dá)90％；(3)繼代培養(yǎng)中最適的6-BA濃度為0.8 mg/L;(4)生根最適合培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.1 mg/L，生根率66.7％。煉苗移栽后，成活率可達(dá)82％。
　　 2.成年態(tài)南豐

3、蜜橘離體培養(yǎng)時發(fā)現(xiàn)，移栽的成年態(tài)植株的污染率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于野外自然條件下生長的植株。秋季取材的污染率要低于春季的。初代培養(yǎng)的莖段長度為0.8cm時，污染率比其他長度小，且腋芽萌發(fā)率高。所以確定南豐蜜橘成年態(tài)初代培養(yǎng)最適的材料為：秋季取自移栽植株的新抽生梢，接種莖段長度為0.8cm適宜。
　　 3.通過對成年態(tài)莖段離體培養(yǎng)，誘導(dǎo)腋芽叢芽發(fā)生，得到了幾個品種的初代培養(yǎng)基配方。其中楊小2-6成年態(tài)莖段在改良MT+6-BA0.8mg/L+I

4、AA0.2mg/L+水解乳蛋白(LH)500 mg/L+葉酸0.1mg/L培養(yǎng)基中的誘導(dǎo)效果最好，腋芽萌發(fā)率達(dá)82％以上，且誘導(dǎo)的腋芽數(shù)多、長勢強；在MS+6-BA0.4mg/L+IAA0.2mg/L+LH500 mg/L+葉酸0.1 mg/L培養(yǎng)基中，小果SS-28成年態(tài)莖段的腋芽誘導(dǎo)效果最好；而MS+6-BA0.8mg/L+IAA0.4mg/L+LH500mg/L+葉酸0.1mg/L培養(yǎng)基最適合于小果SS-7和大果97-1成年態(tài)莖段

5、腋芽的誘導(dǎo)和生長。
　　 4.測定離體培養(yǎng)過程中四種內(nèi)源激素的數(shù)據(jù)表明，植株內(nèi)源激素的變化是明顯的，這也從一個側(cè)面反映出內(nèi)源激素調(diào)控植物生理生化過程。在上胚軸脫分化和再分化過程中，細(xì)胞分裂素(ZT)的含量高時，有利于上胚軸再分化出不定芽，赤霉素(GA)可以促進(jìn)不定芽的生長，脫落酸(ABA)含量升高時會抑制植株的生長；同時也發(fā)現(xiàn)莖段培養(yǎng)過程中GA的含量呈一個下降趨勢，這與上胚軸培養(yǎng)過程GA的變化是相反的。莖段培養(yǎng)過程中的大量愈傷與

6、生長素(IAA)含量升高有直接關(guān)系。測定內(nèi)源激素的變化也進(jìn)一步表明內(nèi)源激素之間的作用是相互的，并不是單一的影響植株的生長和發(fā)育。
　　 5.測定南豐蜜橘離體培養(yǎng)過程的POD活性和分離POD同工酶，發(fā)現(xiàn)在離體培養(yǎng)過程中，POD活性隨著培養(yǎng)物的生長發(fā)育狀態(tài)的改變呈現(xiàn)一定變化規(guī)律；同時分析POD同工酶酶譜，可以發(fā)現(xiàn)同工酶從酶帶深淺、寬窄、多少都表現(xiàn)出一定的差異，最明顯的差異是成年態(tài)培養(yǎng)過程中比上胚軸培養(yǎng)多出一條特征酶帶。這些都可以作為