黃瓜cucumissativusl.離體雌核發(fā)育早期生理生化特性的研究

1、西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文黃瓜（Cucumis sativus L.）離體雌核發(fā)育早期生理生化特性的研究姓名：王曉云申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：曹翠玲;張錫梅20040501A B S T R A C TI n v i t r o g y n o g e n e s i s i s o n eo f t h em a j o rm e t h o d s f o rh a p l o i dp r o d u c t i

2、o n ．T h e r ei sf e w r e p o r ta b o u t p h y s i o l o g i c a la n d b i o c h e m i c a lc h a n g e so f c u c u m b e ri n v i t r og y n o g e n e s i s ．A n e f f i c i e n ta n d s t a b l es y s t e mf o rc

3、u c u m b e r h a p l o i dp r o d u c t i o nv i a i nv i t r og y n o g e n e s i sw a se s t a b l i s h e di nT i a n j i nK e n e i lC u c u m b e rR e s e a r c hI n s t i t u t e ．O nt h eb a s i so ft h i ss y s

4、t e ma n dp r e v i o u s l y m o r p h o l o g i c a l ，p h y s i o l o g i c a l a n d b i o c h e m i c a l s t u d i e s o n c u c u m b e r i n v i t r og y n o g e n e s i s ．M a t e r i a l sf r o m b o t ht y p i

5、 c a lg y n o g e n e s i su s i n gM 9 9 a si n d u c t i o nm e d i u m a n dn o n g y n o g e n e s i s u s i n g W 5 a s i n d u c t i o n m e d i u m W e r e c o l l e c t e d n l e a c t i v i t i e s a n dd i s t

6、r i b u t i o no f p e r o x i d a s e a n d i t si s o e n z y m e s ，c o n t e n t o f s o l u b l e p r o t e i na n d d i s t r i b u t i o no f a l lp r o t e i nd u r i n g e a r l y s t a g e o fc u c u m b e r i

7、n v i t r o g y n o g e n e s i sa n dn o n g y n o g e n e s i sw e r ei n v e s t i g a t e db yb i o c h e m i s t r ya n d h i s t o c h e m i s t r yt e c h n o l o g y ．N u c l e i ca c i da n d a m y l o s e w e r

8、 ea l s o s t u d i e db yh i s t o c h e m i s t r y ．T h e s e r e s e a r c h e sa i m e dt o g i v e ap r o b a t i v ev a l u ef o rc e l ld i f f e r e n t i a t i o nm e c h a n i s m d u r i n g t h e e a r l y s

9、 t a g eo f c u c u r n b e r i nv i t r o g y n o g e n e s i s ．T h e r e s u l t ss h o w e dt h a tt o t a lp e r o x i d a s e ，N A D H p e r o x i d a s e ，a n dg h i t a t h i o n e p e r o x i d a s ea c t i v i

10、t i e so fe x p l a n t si nm e d i u m sM 9 9 w e r ea l l i n c r e a s e dm o r ea n de a r l i e rt h a nt h a ti nW 5 ．W h i l e c y t o c h r o m e p e r o x i d a s ea n d a s c o r b a t e p e r o x i d a s eo f

11、e x p l a n t s i nm e d i u m sM 9 9 w e r e a l w a y sl o w e r t h a nt h a ti nW 5 ．T h eI n d o l e - 3 - a c e t i ca c i do x i d a s ea c t i v i t yo f e x p l a n t si nm e d i u mM 9 9i n c r e a s e d m a r

12、k e d l ya n d r e m a i n e dh i 曲l e v e l ，w h i l e t h a ti nW 5 i n c r e a s e d i nt h ef i r s t5d a y sa n dd e c r e a s e d m a r k e d l y a f t e r 5 - d a y c u l t u r e ，P e r o x i d a s el o c a l i z

13、a t i o ni ne x p l a n t so f m e d i u mM 9 9s h o w e d t h a tt o t a lp e r o x i d a s ew a sf o u n dm a i n l yi nc y t o p l a s mo f o u t e ri n t e g u m e n ta n d n u c e l l a rt i s s u ed u r i n g0 - 2d

14、 a y so fc u l t u r e ，p e r o x i d a s e s a c t i v i t y i n p a r e n c h y m a t i s s u e o fo v a r yi n c r e a s e d g r a d u a l l y w h i c hs h o w e dg r a d i e n ts t a i n i n gf o l l o w i n gc u l t

15、 u r ed a y sa n d p e r o x i d a s e s m a i n l y l o c a l i z e di nc e l lw a l la n dt h ee x t r a c e l l u l a r g a p s ．W h o l e o v u l e c e l l s w e r e c o m p l e t e l y s t a i n e d ．W h i l e i n m

16、 e d i u m W 5p e r o x i d a s e sm o s t l yl o c a l i z e di n o v u l ec e l l se s p e c i a l l y i n i n t e g u m e n td u r i n g2 - 4d a y s a f t e rc u l t u r e ．P e r o x i d a s el o c a t e di n c e l l

17、w a l la n di nt h ee x t r a c e l l u l a rg a p so f p r o l i g e r o u sc e l l si ni n t e g u m e n t a td a y 4 ．S o l u b l e p r o t e i n si ne x p l a n t so f b o t hM 9 9 a n d W 5 w e r ea l li n c r e a s

18、 e ds l i g h t l yi nt h ef i r s t4d a y s o f c u l t u r e ．B u ti td e c r e a s e di ne x p l a n t so f m e d i u m s M 9 9 ．w h i l e i ti n c r e a s e di nt h a to f W 5a f t e r 4d a y sc u l t u r e ．T o t a

19、lp r o t e i ni no v u l e si n c r e a s e d ，w h i l e t h a ti np a r e n c h > r m ao f m e d i u m sM 9 9 d e c r e a s e d ．B u tt o t a lp r o t e i ni n b o t ho v u l e sa n dp a r e n c h y m ao f m e d i u

20、m sW 5 w e r ea l li n c r e a s e d ．I n e x p l a n t so f M 9 9 ，D N A a n d R N A c o n t e n ti n c r e a s e di no v u l e s ，e s p e c i a l l yi nn u c e l l u s ．S m a l ls t a r c hg r a i n sa p p e a r e di n