氚標(biāo)乙酰甲喹的合成及其在動物體內(nèi)的處置研究.pdf

1、乙酰甲喹是我國于上世紀(jì)八十年代開發(fā)的用于治療豬痢疾、雞白痢等疾病的喹噁啉類動物專用藥。雖然我國已經(jīng)批準(zhǔn)了乙酰甲喹的上市，但在使用過程中，有很多關(guān)于雞、豬中毒的相關(guān)報(bào)道，鑒于其和喹嗯啉類相同的母環(huán)結(jié)構(gòu)，其藥物原形或代謝物可能存在毒性，從而對食品安全造成隱患。另外，國內(nèi)外沒有制定乙酰甲喹的休藥期、殘留靶組織和殘留標(biāo)示物，這也給其臨床上的合理用藥和食品安全的殘留檢測帶來難度。目前國內(nèi)外對乙酰甲喹在動物體內(nèi)的吸收、分布、排泄和代謝很少或未見相關(guān)

2、報(bào)道。因此，本課題以乙酰甲喹為研究對象，采用放射性同位素標(biāo)記技術(shù)和液相與離子阱飛行時(shí)間質(zhì)譜(LC/MS-ITTOF)聯(lián)用技術(shù)，研究[3H]乙酰甲喹及其代謝物在大鼠、雞和豬體內(nèi)的吸收、分布、排泄和代謝，確定乙酰甲喹在大鼠、雞和豬體內(nèi)的排泄和分布情況，確定殘留靶組織；分離鑒定體內(nèi)的代謝物并對可食性組織中主要代謝物進(jìn)行相對定量，確定它們的殘留消除規(guī)律，闡明乙酰甲喹在動物體內(nèi)的殘留標(biāo)示物和毒性代謝物。
　　 1.氚標(biāo)乙酰甲喹的合成

3、>　　 氚標(biāo)乙酰甲喹以氚標(biāo)鄰硝基苯胺為起始原料，經(jīng)過氧化和Beirut縮合兩步反應(yīng)得到。首先，將30mg氚標(biāo)鄰硝基苯胺溶入180ml異丙醇中，在12mg氫氧化鈉提供的堿性條件下加入500ml次氯酸鈉氧化，反應(yīng)3小時(shí)后得到氚標(biāo)苯并夫咱-1-氧化物；第二步，將上一步反應(yīng)所得的20mg產(chǎn)物用300ml三乙胺溶解，加入100ml乙酰丙酮進(jìn)行Beirut縮合反應(yīng)，15小時(shí)后得到氚標(biāo)乙酰甲喹。
　　 用高效液相色譜對目標(biāo)產(chǎn)物和乙酰甲喹對照

4、品進(jìn)行比較，測定其化學(xué)純度，用高效液相色譜和液體閃爍儀聯(lián)用技術(shù)測定其放化純度，對目標(biāo)產(chǎn)物稱重后計(jì)算收率和比活度。結(jié)果表明，合成的氚標(biāo)乙酰甲喹的收率在45％-55％之間，化學(xué)純度≥98％，放化純度≥99％，比活度為16.9Ci/g，其化學(xué)純度和放化純度均達(dá)到動物實(shí)驗(yàn)的要求。
　　 2氚標(biāo)乙酰甲喹在大鼠、雞和豬體內(nèi)的處置研究
　　 大鼠、雞（代謝組分5組，每組4只，排泄組6只）和豬（代謝組分5組，每組2頭，排泄組4頭）按10

5、mg/kgb.w.(大鼠、雞比活度110mCi/g，豬169mCi/g)單次灌胃給藥，給藥后排泄組每24h收集尿液、糞便，消化后經(jīng)液閃儀測定放射活度，計(jì)算[3H]乙酰甲喹的排泄情況；各組動物分別在給藥后6h、1d、2d、4d、6d和10d宰殺（豬為6h、1d、3d、6d、10d和15d），取體內(nèi)的各個(gè)組織，消化后經(jīng)液閃儀檢測放射活度，測定藥物在體內(nèi)各組織中的分布情況；利用不同試劑對排泄物和可食性組織樣品進(jìn)行提取、凈化，測定提取液放射活度

6、計(jì)算提取率，然后進(jìn)行HPLC/MS-IT-TOF進(jìn)行代謝物分離鑒定；采用同樣的提取凈化后，經(jīng)HPLC分析進(jìn)行代謝物的相對定量。
　　 結(jié)果顯示，大鼠、雞和豬給藥后排泄物中的放射活度回收率0-0.5d分別為34.55％、39.9％和32.04％,0.5-1d為28.11％、31.25％和30.68％，1-3d為15.21％、11.06％和11.26％,3-6d為12.96％、6.59％和8.6％,6-10d為2.9％、5.87％和

7、7.17％，豬10-15d為2.12％，總計(jì)分別為93.81％、94.67％和91.85％，其中大鼠和豬尿液中的放射活度回收率分別達(dá)到84.03％和83.5％；藥物在組織中分布廣泛，給藥后6h大鼠、雞和豬各個(gè)組織中的藥物濃度分別在500μg/kg、800μg/kg和1400μg/kg以上，藥物消除較快，2d(豬為3d)后各組織中的藥物濃度分別下降到100μg/kg、100μg/kg和200μg/kg以下（肝臟、腎臟除外）；大鼠給藥后6d

8、，雞給藥后4d，豬給藥后10d，除肝臟、腎臟、膽汁外其他組織檢測不到藥物，最后一組動物宰殺后只在肝臟中檢測到藥物，乙酰甲喹的總殘留在大鼠、雞和豬各組織中殘留時(shí)間最長的為肝臟，因此，確定肝臟為殘留靶組織。排泄、分布結(jié)果表明，乙酰甲喹在大鼠、雞和豬體內(nèi)吸收快，排泄快，分布廣泛。
　　 乙酰甲喹在大鼠、雞和豬體內(nèi)分別發(fā)現(xiàn)11、12和8種代謝物，三種動物之間大部分代謝物相同，但存在差異，例如代謝物M11只在雞體內(nèi)檢出，而代謝物M5只在豬

9、體內(nèi)發(fā)現(xiàn)。從代謝物的結(jié)構(gòu)分析，乙酰甲喹在三種動物體內(nèi)的代謝途徑和代謝方式相同，主要發(fā)生脫氧、羰基還原和羥基化。大鼠、雞和豬可食性組織中不同時(shí)間點(diǎn)體內(nèi)的代謝物均以肝臟最多，分別為8種(M0、M1、M2、M3、M4、M8、M10和M14)、7種(M1、M2、M3、M4、M7、M8和M10)和7種（M1、M2、M3、M4、M5、M8和M10）。各個(gè)代謝物在大鼠、雞和豬體內(nèi)的消除速率存在差異，給藥后4d大鼠肝臟中只有代謝物M2、M4和M10,雞

10、肝臟中只有代謝物M4，豬給藥后6d肝臟中只有代謝物M2和M4。結(jié)果表明，乙酰甲喹在體內(nèi)很快代謝，且生成的代謝物較多，主要代謝物可能存在種屬差異。
　　 對殘留靶組織肝臟中主要代謝物進(jìn)行峰面積的相對定量，然后用最后三個(gè)點(diǎn)的藥物濃度和時(shí)間進(jìn)行半對數(shù)線性回歸，得到回歸方程，計(jì)算總殘留和主要代謝物的半衰期。結(jié)果顯示，大鼠、雞和豬肝臟中總殘留的半衰期分別為1.39d、0.83d和1.62d，代謝物M4的半衰期分別為1.67d、0.84d和

11、1.63d，代謝物M2的半衰期分別為0.98d、0.35d和1.54d。大鼠、雞和豬肝臟中主要的代謝物M4的殘留消除規(guī)律與總殘留的消除規(guī)律存在一定的相關(guān)性，因此，乙酰甲喹的殘留標(biāo)示物可能為代謝物M4。
　　 綜上所述，本論文首次合成了放射性同位素標(biāo)記的[3H]乙酰甲喹，研究了其相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；闡明了乙酰甲喹在大鼠、雞和豬體內(nèi)的吸收、分布和排泄特點(diǎn)；分離并鑒定了大鼠、雞和豬體內(nèi)的代謝產(chǎn)物，并對可食性組織中主要的代謝物進(jìn)行了相對定量