不同脫毒方法對紅江橙種性變異及脫黃龍病毒效果的影響.pdf

1、柑桔黃龍病的肆虐流行導致紅江橙瀕臨毀滅,同時紅江橙的嵌合特性也導致紅江橙果實性狀不穩(wěn)定,嚴重影響了紅江橙的發(fā)展。為此,建立一整套柑橘無病毒苗木繁育體系和明確紅江橙在組培過程中是否會發(fā)生分離是亟待解決的問題。
　　 利用組織培養(yǎng)培育紅江橙的敗育胚以得到無毒苗；取成年感病莖尖和健康的紅江橙的莖尖為試材,進行微芽嫁接得到無毒苗；采用離體莖段培養(yǎng)對紅江橙進行快繁以及種質(zhì)保留；對帶毒材料和嫁接成活植株進行聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)檢測；用S

2、SR分子標記技術(shù)鑒定紅江橙莖段在組培過程中是否發(fā)生分離。主要的結(jié)果表明如下:
　　 1.本試驗設(shè)想根據(jù)敗育胚保持母本的特性,通過胚性愈傷組織培育出無毒苗。但經(jīng)PCR檢測,通過敗育胚所得幼苗為橙,用敗育胚培養(yǎng)無毒苗的設(shè)想不可行。
　　 2.紅江橙離體莖段材料用1/200消佳凈浸泡10min后,用無菌水沖洗數(shù)次,70％酒精處理1min,0.1％HgCl2處理15min,效果最佳,成功率達90％以上。
　　 3.通過改

3、進的方法提高了莖尖嫁接成活率,倒“T”型法的嫁接成活率最低,只有10％,其次為橫壓法,為10.4％,成活率最高的為三角形法,成活率達到了28.6％,點插法成活率為20％.
　　 4.誘導紅江橙離體莖段出芽的最佳激素組合為:MT+6-BA1.0mg.L-1+IBA0.5mg.L-1+GA30.5mg.L-1;敗育胚通過胚性愈傷組織得無毒苗的激素組合為:MT+IAA0.2mg.1-1+6-BA0.5mg.1-1+ZT0.5mg.1-

4、1。
　　 5.在試驗中技術(shù)鑒定發(fā)現(xiàn)紅江橙在組培過程中繼續(xù)發(fā)生分離,依靠組織培養(yǎng)對紅江橙進行快繁以及種質(zhì)保留是不可行的。
　　 6.根據(jù)黃龍病病原的核苷酸序列設(shè)計PCR引物。脫毒前利用PCR對感病的紅江橙進行檢測。結(jié)果擴增到特異性電泳區(qū)帶,這與設(shè)計的擴增片斷一致,證明是感染黃龍病病原的植株。
　　 7.對嫁接成活苗進行了PCR未檢測到黃龍病的病原,說明莖尖嫁接脫除黃龍病病原是有效的,可以為無病毒苗木的繁殖提供健康