菊花病毒鑒定及莖尖培養(yǎng)脫毒方法研究.pdf

1、菊花（Chrysanthemum×morifolium）原產(chǎn)我國，是我國十大傳統(tǒng)名花和世界四大切花之一，具有重要的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在生產(chǎn)和園林應(yīng)用中占有十分重要的地位。然而，菊花采取無性繁殖，極易受到病毒、類病毒的危害。菊花一旦感染病毒，則終身帶毒，造成持久性的危害，最終導(dǎo)致菊花種性的退化，病毒卻隨著菊花繁殖系數(shù)的增加而加快傳播擴(kuò)散;菊花受病毒侵染后出現(xiàn)花葉、斑駁、畸形、矮化等癥狀，導(dǎo)致觀賞性狀下降;有些病毒侵染菊花后，并不呈現(xiàn)癥狀

2、，卻隨著植株的生長而植株體內(nèi)逐漸積累，導(dǎo)致菊花種性退化;此外，由于環(huán)境的作用和田間管理不科學(xué)，菊花容易受到幾種病毒的復(fù)合感染。
　　 目前，對(duì)于菊花病毒病的防治尚無有效的化學(xué)藥劑，因此，要建立一種靈敏、快速、可靠的病毒鑒定方法，確定病毒種類，及時(shí)將病株隔離，防止病毒（類病毒）的擴(kuò)散，同時(shí)，使用簡單、高效的脫毒技術(shù)，改善菊花品質(zhì)，恢復(fù)菊花種性。本研究以田間染病的菊花為材料，研究病毒的鑒定和脫毒方法。主要研究結(jié)果如下:
　　

3、 (1)運(yùn)用DAS-ELISA檢測CVB和TAV兩種病毒，通過設(shè)計(jì)四種病毒的引物，運(yùn)用單重RT-PCR方法鑒定CVB、TAV病毒和CChMVd、CSVd等類病毒。實(shí)驗(yàn)證明DAS-ELISA方法可以檢測病毒，而RT-PCR方法不僅可以檢測病毒，還可以檢測類病毒，檢測范圍更廣。
　　 (2)在單重RT-PCR的基礎(chǔ)上，通過對(duì)四對(duì)病毒引物濃度進(jìn)行優(yōu)化，建立了一種可以同時(shí)檢測CVB、TAV、CSVd和CChMVd的多重RT-PCR體系，

4、并運(yùn)用該方法鑒定了自然條件下的病毒侵染情況，從而建立了一種同時(shí)檢測兩種或兩種以上的病毒多重RT-PCR方法。
　　 (3)進(jìn)行了DAS-ELISA和RT-PCR方法的靈敏度比較試驗(yàn)，結(jié)果表明，RT-PCR方法的檢測的靈敏度可達(dá)Pg級(jí)，是DAS-ELISA方法的100倍。
　　 (4)分別切取＜0.3 mm，0.3-0.7 mm，0.7-1.0 m的菊花莖尖和使用二次莖尖培養(yǎng)法對(duì)菊花莖尖進(jìn)行脫毒培養(yǎng)，并結(jié)合RT-PCR方法