柑橘成年態(tài)組織培養(yǎng)及脫毒方法的研究.pdf

1、目前我國柑橘黃龍病的防治主要依靠傳統(tǒng)方法:砍除病樹，控制木虱和培育無病毒苗木。本試驗主要將藥劑處理與傳統(tǒng)脫毒方法相結合，并通過柑橘成年態(tài)莖段培養(yǎng)、微芽嫁接方法獲得無病毒苗木，具體研究內容如下:
　　1、成年態(tài)培養(yǎng)產生多重芽。試驗中探討了清家臍橙成年態(tài)莖段不同消毒方式的污染率和成活率、不同激素配比下產生的多重芽數(shù)，結果表明:10％體積比的NaClO消毒30 min，間隔2h再次采用10％NaClO消毒20 min消毒效果最佳;MS培

2、養(yǎng)基附加2.0 mg/L6-BA和0.2 mg/L NAA產生的多重芽數(shù)最多，平均達3.97個，利用率稍低;MS培養(yǎng)基附加1.5 mg/L6-BA和0.3 mg/L NAA產生的多重芽數(shù)平均達2.57個，芽的形態(tài)正常，利用率較高。
　　2、抗生素處理柑橘植株脫毒試驗。利用廣譜抗生素甲硝銼與芬布芬復合劑200mg/L、鹽酸特比萘芬100mg/L、奧硝唑200mg/L對離體紐荷爾植株浸泡1h進行處理能較好的抑制黃龍病的發(fā)展;使用抗生素

3、頭孢菌素、氟喹諾酮、青霉素200mg/L濃度對綠橙活體植株進行12個周期，每5天一個周期的處理，得到脫毒率分別為50％、75％、50％，以上三種抗生素組合處理，脫毒率為100％。說明使用爭對革蘭氏陰性菌的抗生素對柑橘黃龍病菌進行處理有很大的應用前景。
　　3、采用微芽嫁接方法獲得無毒苗。通過微芽嫁接共獲得52株成活植株，其中有三種來源的接穗，即成年態(tài)培養(yǎng)產生的多重芽、離體枝條藥劑處理芽、當季普通芽。嫁接成活植株包含12個品種，其中

4、翡翠柚、紐荷爾臍橙、大浦（溫州蜜柑）三個品種的成活率稍高于其他品種，成活率分別為6.36％、5.53％和5.44％。通過對28株嫁接成活植株為期8-12個月的培養(yǎng)，取葉片檢測得出脫毒率為89.29％。
　　4、采用亞洲種黃龍病16S rDNA區(qū)引物對OI1/OI2c對海南樣DNA進行擴增并測序，分析表明，海南瓊中綠橙樣分離物在16S rDNA區(qū)序列與日本沖繩株系遺傳距離最近，同源性達99％。
　　5、連續(xù)2年對海南瓊中地區(qū)大