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文檔簡(jiǎn)介
1、本文以斜帶石斑魚(yú)仔稚魚(yú)、不同生長(zhǎng)速度的兩批幼魚(yú)及溶藻弧菌感染后的斜帶石斑魚(yú)為研究對(duì)象,利用純培養(yǎng)方法結(jié)合PCR/DGGE方法對(duì)石斑魚(yú)消化道菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究,主要結(jié)果如下:
⑴斜帶石斑魚(yú)仔稚魚(yú)消化道菌群結(jié)構(gòu)的研究。以斜帶石斑魚(yú)孵化后2d(未開(kāi)口)仔魚(yú)、8d(開(kāi)口仔魚(yú))、22d仔魚(yú)、40d稚魚(yú)為研究對(duì)象,分析由孵化到稚魚(yú)的不同生長(zhǎng)階段消化道菌群結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明,仔稚魚(yú)消化道可培養(yǎng)細(xì)菌總數(shù)隨著生長(zhǎng)日齡的增加而逐漸遞增,由4.0×1
2、02CFU/尾增加到1.4×107CFU/尾;2d仔魚(yú)分離到乳酸菌,未分離到弧菌;8d、22d仔魚(yú)及40d幼魚(yú)均未分離到乳酸菌,22d仔魚(yú)、40d幼魚(yú)分離到弧菌;開(kāi)口前后可培養(yǎng)細(xì)菌種類(lèi)變化較大,種類(lèi)由多到少。2d、8d、22d仔魚(yú)和40d幼魚(yú)可培養(yǎng)細(xì)菌種類(lèi)分別為6種、3種、5種、10種;2d、8d及22d仔魚(yú)與進(jìn)水口細(xì)菌種類(lèi)有一定的相似,8d仔魚(yú)及22d仔魚(yú)與其餌料細(xì)菌種類(lèi)有一定程度的相似。DGGE結(jié)果顯示,2d、8d和22d仔魚(yú)消化道
3、菌群DGGE圖譜相似,仔魚(yú)和40d稚魚(yú)消化道菌群DGGE圖譜存在明顯差異;仔魚(yú)與養(yǎng)殖水體菌群DGGE圖譜具有一定的相似性;22d仔魚(yú)與后期餌料輪蟲(chóng)菌群圖譜相似性較高,8d仔魚(yú)與早期餌料牡蠣受精卵的相似性較低。
⑵不同生長(zhǎng)速度斜帶石斑魚(yú)幼魚(yú)消化道菌群結(jié)構(gòu)的研究。利用純培養(yǎng)方法結(jié)合PCR/DGGE方法,分析不同生長(zhǎng)速度70d幼魚(yú)消化道菌群結(jié)構(gòu)。純培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明,生長(zhǎng)速度慢的幼魚(yú)消化道細(xì)菌總數(shù)(5.4×106CFU/g)少于生
4、長(zhǎng)速度快的幼魚(yú)消化道細(xì)菌總數(shù)(9.0×106CFU/g),但生長(zhǎng)速度慢的幼魚(yú)消化道弧菌數(shù)量(6.0x105CFU/g)明顯多于生長(zhǎng)速度快的幼魚(yú)(3.4×105CFU/g),生長(zhǎng)速度慢的幼魚(yú)消化道乳酸菌數(shù)量(1.5×105CFU/g)也多于生長(zhǎng)速度快的幼魚(yú)消化道乳酸菌數(shù)量(6.0×104 CFU/g)。水樣中分離到的細(xì)菌總數(shù)(5.4×105CFU/ml)、弧菌數(shù)(2.2×103 CFU/ml)均少于幼魚(yú)消化道;水樣中未分離到乳酸菌。生長(zhǎng)速
5、度慢的幼魚(yú)消化道中四種弧菌占細(xì)菌總數(shù)的12.3%,生長(zhǎng)速度快的幼魚(yú)消化道中僅兩種弧菌,占細(xì)菌總數(shù)的比例降低到3.6%;生長(zhǎng)速度慢的幼魚(yú)消化道中假單胞菌所占細(xì)菌比例12.0%,生長(zhǎng)速度快的幼魚(yú)消化道中假單胞菌占細(xì)菌總數(shù)降低到5.6%。僅在生長(zhǎng)速度快的幼魚(yú)消化道分離到短小芽孢桿菌、克勞氏芽孢桿菌和嗜冷桿菌且數(shù)量占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。抑菌試驗(yàn)表明,短小芽孢桿菌、克勞氏芽孢桿菌和嗜冷桿菌對(duì)弧菌具有抑制生長(zhǎng)作用。提示短小芽孢桿菌、克勞氏芽孢桿菌和嗜冷桿菌可
6、能與石斑魚(yú)的生長(zhǎng)和健康有關(guān)。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)結(jié)果表明,兩組幼魚(yú)消化道的17種細(xì)菌隸屬于γ-變形桿菌綱,β-變形桿菌綱和芽孢桿菌綱。DGGE結(jié)果顯示,生長(zhǎng)速度慢的幼魚(yú)消化道菌群多樣性明顯低于生長(zhǎng)速度快的幼魚(yú)消化道。割膠測(cè)序結(jié)果顯示,生長(zhǎng)速度快的幼魚(yú)消化道優(yōu)勢(shì)菌隸屬于不動(dòng)桿菌屬細(xì)菌(Acinetobacter baumannii)、結(jié)核桿菌(Mycobacterium tuberculosis)、脫硫腸球菌屬細(xì)菌(Desulfotomaculum
7、 reducens)和Petrotoga mobilis;生長(zhǎng)速度慢的幼魚(yú)優(yōu)勢(shì)菌均隸屬于不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)。
⑶溶藻弧菌感染后斜帶石斑魚(yú)消化道菌群結(jié)構(gòu)的研究。溶藻弧菌感染后斜帶石斑魚(yú)消化道菌群分析結(jié)果顯示,對(duì)照組胃(1.2×105CFU/g)、前腸(5.1×106CFU/g)和后腸(2.8×105CFU/g)和實(shí)驗(yàn)組的胃(3.0×105CFU/g)、前腸(3.1×106CFU/g)、后腸(3.1x10
8、6 CFU/g)的細(xì)菌總數(shù)量相近;對(duì)照組石斑魚(yú)胃和后腸細(xì)菌種類(lèi)明顯多于實(shí)驗(yàn)組石斑魚(yú)胃和后腸,但對(duì)照組前腸細(xì)菌種類(lèi)少于實(shí)驗(yàn)組前腸細(xì)菌種類(lèi)。DGGE結(jié)果顯示,對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)菌多樣性具有明顯差異。斜帶石斑魚(yú)胃菌群結(jié)構(gòu)在灌胃溶藻弧菌后第1d到第3d細(xì)菌多樣性變化不大,但第4d細(xì)菌種類(lèi)明顯減少,第5d細(xì)菌種類(lèi)則呈回升趨勢(shì);前腸細(xì)菌多樣性分析顯示,實(shí)驗(yàn)組第1d和對(duì)照組有一定的相似性,實(shí)驗(yàn)組第3d和第4d相似性較高,細(xì)菌多樣性明顯減少;后腸細(xì)菌多樣
9、性分析顯示,灌胃溶藻弧菌第1d時(shí),細(xì)菌種類(lèi)較多,第4d時(shí),細(xì)菌多樣性降到最低,對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組第1d和第5d相似性較高,實(shí)驗(yàn)組第3d和第4d相似性較高。割膠測(cè)序結(jié)果顯示,Escherichia coli、Petrotoga mobilis和Vibrio furnissii三種菌在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組5d內(nèi)的胃、前腸、后腸均檢測(cè)到,實(shí)驗(yàn)組第4d細(xì)菌可檢出細(xì)菌種類(lèi)很少,而Shewanella sp.和Vibriofischeri泳帶很強(qiáng),為第4d的
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