絨山羊FGF5基因的序列分析及其敲除載體構(gòu)建.pdf

1、成纖維細(xì)胞生長因子5(Fibroblast Growth Factor-5，F(xiàn)GF5)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和皮膚中表達(dá)，在皮膚中抑制毛囊由興盛期向休止期轉(zhuǎn)化，F(xiàn)GF5敲除小鼠的被毛明顯長于對(duì)照。其他動(dòng)物如狗、貓和兔子的研究表明FGF5的變異與毛被的長短有關(guān)。關(guān)于山羊FGF5的變異和毛被長短的關(guān)系還不明確。本文針對(duì)山羊FGF5基因進(jìn)行了研究，取得了如下結(jié)果：
　　選用阿爾巴斯絨山羊?yàn)椴牧?，通過PCR擴(kuò)增、克隆FGF5啟動(dòng)子、第一外顯子、第

2、一內(nèi)含子，測序后拼接成全長為9483bp的序列，其中第一外顯子為364bp，第一內(nèi)含子為7809bp。為后續(xù)的多態(tài)性分析和敲除載體的構(gòu)建奠定了基礎(chǔ)。將絨山羊FGF5第一內(nèi)含子序列和GenBank中3個(gè)人的基因組進(jìn)行Blastn比對(duì)發(fā)現(xiàn)，人和絨山羊 FGF5第一內(nèi)含子呈高度的同線性同源序列，有3個(gè)高同源區(qū)，同源性分別為69％、70%和75%；有兩個(gè)低同源區(qū)，第一個(gè)非同源區(qū)位于1545bp-2368bp和1545bp-2788bp之間，第二

3、個(gè)非同源區(qū)位于6799bp-6860bp之間；與牛FGF5第一內(nèi)含子序列相比，牛 FGF5基因的第一內(nèi)含子要比絨山羊的序列多出兩部分，位于4728bp-4729bp之間的274bp和位于5378bp-5379bp之間的1365bp片段。
　　通過PCR產(chǎn)物直接測序，結(jié)合已經(jīng)發(fā)布的羊cDNA序列對(duì)阿爾巴斯絨山羊、奶山羊、蒙古羊（綿羊）的成纖維細(xì)胞生長因子5（FGF5）基因的3個(gè)外顯子進(jìn)行變異分析，如奶山羊和蒙古羊在FGF5基因距翻譯

4、起始密碼子(ATG)273位點(diǎn)都存在T和C的雜合位點(diǎn)，絨山羊?yàn)镃。該變異未引起山羊FGF5氨基酸序列的改變，絨山羊和蒙古羊比較有4個(gè)核苷酸發(fā)生變異。將三個(gè)品種的FGF5基因外顯子序列預(yù)測成氨基酸序列，綿羊和山羊距翻譯起始密碼子(ATG)161位點(diǎn)有一處不同，絨山羊和奶山羊?yàn)锳(丙氨酸)，密碼子為GCG；而蒙古羊?yàn)閂(纈氨酸)，密碼子為GTG。
　　將絨山羊FGF5啟動(dòng)子至第一外顯子1.6kb片段插入到敲除載體pLox的XbaⅠ和C