1、成纖維細(xì)胞生長因子5(Fibroblast Growth Factor-5,F(xiàn)GF5)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和皮膚中表達(dá),在皮膚中抑制毛囊由興盛期向休止期轉(zhuǎn)化,F(xiàn)GF5敲除小鼠的被毛明顯長于對照。其他動物如狗、貓和兔子的研究表明FGF5的變異與毛被的長短有關(guān)。關(guān)于山羊FGF5的變異和毛被長短的關(guān)系還不明確。本文針對山羊FGF5基因進行了研究,取得了如下結(jié)果:
選用阿爾巴斯絨山羊為材料,通過PCR擴增、克隆FGF5啟動子、第一外顯子、第
2、一內(nèi)含子,測序后拼接成全長為9483bp的序列,其中第一外顯子為364bp,第一內(nèi)含子為7809bp。為后續(xù)的多態(tài)性分析和敲除載體的構(gòu)建奠定了基礎(chǔ)。將絨山羊FGF5第一內(nèi)含子序列和GenBank中3個人的基因組進行Blastn比對發(fā)現(xiàn),人和絨山羊 FGF5第一內(nèi)含子呈高度的同線性同源序列,有3個高同源區(qū),同源性分別為69%、70%和75%;有兩個低同源區(qū),第一個非同源區(qū)位于1545bp-2368bp和1545bp-2788bp之間,第二
3、個非同源區(qū)位于6799bp-6860bp之間;與牛FGF5第一內(nèi)含子序列相比,牛 FGF5基因的第一內(nèi)含子要比絨山羊的序列多出兩部分,位于4728bp-4729bp之間的274bp和位于5378bp-5379bp之間的1365bp片段。
通過PCR產(chǎn)物直接測序,結(jié)合已經(jīng)發(fā)布的羊cDNA序列對阿爾巴斯絨山羊、奶山羊、蒙古羊(綿羊)的成纖維細(xì)胞生長因子5(FGF5)基因的3個外顯子進行變異分析,如奶山羊和蒙古羊在FGF5基因距翻譯
4、起始密碼子(ATG)273位點都存在T和C的雜合位點,絨山羊為C。該變異未引起山羊FGF5氨基酸序列的改變,絨山羊和蒙古羊比較有4個核苷酸發(fā)生變異。將三個品種的FGF5基因外顯子序列預(yù)測成氨基酸序列,綿羊和山羊距翻譯起始密碼子(ATG)161位點有一處不同,絨山羊和奶山羊為A(丙氨酸),密碼子為GCG;而蒙古羊為V(纈氨酸),密碼子為GTG。
將絨山羊FGF5啟動子至第一外顯子1.6kb片段插入到敲除載體pLox的XbaⅠ和C