轉crylAc基因抗蟲棉鄂雜棉1號外源插入序列分析及特異性PCR檢測方法.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、轉基因作物的分子結構特征既是對其進行安全性評價的基礎,也是建立定性和定量檢測方法的基礎。本研究以轉cry1Ac基因抗蟲棉“鄂雜棉1號”為實驗材料,探索了其外源DNA插入結構的分析方法,并對其基因組一端旁側序列進行了初步解析；在此基礎上建立了品系特異性定性PCR及定量PCR檢測方法,所建立的定性定量檢測方法穩(wěn)定性好、特異性強、靈敏度高,各項參數(shù)滿足國際轉基因成分檢測技術要求。得到的主要結果如下:
　　 一、解析了轉cry1Ac基因

2、抗蟲棉“鄂雜棉1號”的外源DNA插入結構,并通過GenomeWalking方法獲得了其外源基因插入位點處基因組序列信息。獲得的外源插入序列及其旁側序列的長度為13198bp,其中1-11901bp屬于外源DNA序列,11902-13198bp屬于棉花基因組序列；插入片段包含1個完整拷貝的cry1Ac抗蟲基因和1個完整拷貝的nptⅡ報告基因。
　　 二、基于轉cry1Ac基因抗蟲棉“鄂雜棉1號”基因組DNA的一端旁側序列,分別建立

3、了品系特異性定性PCR及定量PCR檢測方法。其中,定性PCR檢測方法所設計引物對14-QF／14-F4的檢測靈敏度是43個拷貝,相當于檢測極限為0.1％(以模板DNA為100ng計)；初步試用結果表明,該定性檢測方法穩(wěn)定性好、特異性強、靈敏度高,適用于“鄂雜棉1號”定性檢測。定量PCR檢測方法的定量限為50拷貝,檢測限為不大于50拷貝,這幾項參數(shù)的測試指標可以滿足目前國際國內5％-0.5％的轉基因成分標識閾值或檢測水平的需要。通過轉基因

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