角蠅體內(nèi)斯氏副柔線蟲的觀察及COI基因特異性序列分析.pdf

1、斯氏副柔線蟲（Parabronema skrjabini）是一種寄生于駱駝皺胃的寄生性線蟲，其中間宿主是西方角蠅(Haematobia irritans）和截脈角蠅(Haematobia titillans）。為了明確我國雙峰駝養(yǎng)殖地區(qū)斯氏副柔線蟲對角蠅的感染情況、寄生部位，斯氏副柔線蟲所在副柔屬的歸科問題，以及尋找一種適合于該病生前診斷方法的遺傳標記。本文統(tǒng)計了雙峰駝生活環(huán)境中角蠅體內(nèi)斯氏副柔線蟲的感染率和感染強度，明確了其寄生部位；

2、并利用PCR技術(shù)擴增分析了斯氏副柔線蟲線粒體 DNA的COI基因序列，在此基礎(chǔ)上設(shè)計出了特異性引物并加以驗證。結(jié)果如下：
　　采用生物解剖法對采集于內(nèi)蒙古巴彥淖爾市烏拉特后旗的176只角蠅（西方角蠅64只，截脈角蠅112只）進行了剖解，共有38只為陽性，感染率為21.59％。其中西方角蠅中13只為陽性，感染率為20.31%，最大感染強度為32條/只，平均感染強度是8條/只；截脈角蠅中25只為陽性，感染率為22.32%，最大感染強度

3、為23條/只，平均感染強度是9條/只。斯氏副柔線蟲幼蟲主要寄生在角蠅的消化道內(nèi)。
　　利用PCR方法，以線蟲COI基因通用引物NTF、NTR擴增內(nèi)蒙古不同地區(qū)的斯氏副柔線蟲線粒體 DNA COI基因。將擴增產(chǎn)物純化后克隆并測序。經(jīng) DNAStar5.0和MEGA4.0分析，結(jié)果表明：擴增出的COI基因序列均為689bp，不同地區(qū)樣本間的COI基因無差異；斯氏副柔線蟲 COI基因與旋尾目（Spirurata）中旋尾科（Spiruri

4、dae）、柔線科（Habronematidae）和吸吮科（Thelaziidae），絲蟲目（Filariata）盤尾科（Onchocercidae）某些線蟲的同源性為79.8%～87.4%，遺傳距離為0.137～0.232?；贑OI基因構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹表明，副柔屬歸于柔線科更符合生物進化的規(guī)律。
　　以COI基因設(shè)計并合成特異性引物STF、STR，利用PCR方法對斯氏副柔線蟲基因組進行特異性擴增后可得到約600bp的條帶。敏感性