文蛤(Meretrix meretrix)不同殼色花紋品系的分子標(biāo)記及DNA甲基化分析.pdf

1、文蛤(Meretrix meretrix)在我國(guó)南北沿海均有分布,屬?gòu)V溫、廣鹽性灘涂埋棲型經(jīng)濟(jì)貝類(lèi),也是我國(guó)主要養(yǎng)殖貝類(lèi)和出口水產(chǎn)品之一。培育抗病、抗逆和生長(zhǎng)迅速的新品種是文蛤養(yǎng)殖業(yè)健康與可持續(xù)性發(fā)展的有效途徑,而飛速發(fā)展的分子標(biāo)記輔助育種技術(shù)為優(yōu)良水產(chǎn)品種的快速培育提供了理論基礎(chǔ)和實(shí)踐指導(dǎo)。隨著生物分子標(biāo)記輔助育種技術(shù)的不斷發(fā)展和完善,也出現(xiàn)了眾多的亟待解決的問(wèn)題,如選育群體的遺傳多樣性的維系和重要經(jīng)濟(jì)性狀的遺傳學(xué)分析等。本研究以文蛤

2、4個(gè)殼色花紋選育品系(紅殼(RS)、黑斑(BS)、細(xì)紋(TC)、暗紋(DF))為主要研究材料,利用AFLP、SSR分子標(biāo)記技術(shù)及甲基化敏感多態(tài)性(MSAP)技術(shù)相結(jié)合對(duì)4個(gè)選育品系進(jìn)行了遺傳差異分析,為優(yōu)良品種的選育及種質(zhì)資源保護(hù)提供了理論基礎(chǔ)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。所取得的主要研究結(jié)果如下:
　　 1.利用15對(duì)引物組合對(duì)4品系共128個(gè)個(gè)體進(jìn)行了AFLP分析,共得到789個(gè)位點(diǎn),總多態(tài)位點(diǎn)比例90.75％。Nei’s基因多樣性和Shan

3、non’s信息指數(shù)顯示,4個(gè)品系的遺傳多樣性大小依次為BS品系>RS品系>DF品系>TC品系。AMOVA分析表明,79.45％的變異來(lái)自品系內(nèi),品系間的變異只占20.55％。聚類(lèi)分析結(jié)果表明,4個(gè)品系間存在較明顯的遺傳差異,TC品系與其它品系的遺傳差異最大,DF品系和RS品系的遺傳差異相對(duì)較小。發(fā)現(xiàn)1個(gè)TC品系特有的AFLP標(biāo)記,其出現(xiàn)頻率為1.000,可作為品系鑒別的特征性標(biāo)記。
　　 2.SSR分析結(jié)果表明,所選擇的9個(gè)微衛(wèi)

4、星位點(diǎn)在所檢測(cè)品系中都表現(xiàn)出了較好的多態(tài)性,9個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)在這4個(gè)品系中共檢測(cè)到105個(gè)等位基因。等位基因數(shù)目最多的是WG07,共檢測(cè)到21個(gè)等位基因,WG11檢測(cè)到的最少,為7個(gè)等位基因。每個(gè)品系均具有特異等位基因類(lèi)型,不同品系中相同微衛(wèi)星位點(diǎn)的等位基因的分布規(guī)律不同。4個(gè)文蛤品系的多態(tài)信息含量(PIC)在0.433—0.834之間,觀測(cè)雜合度的范圍在0.110-1.000之間,期望雜合度的變化范圍在0.486—0.867之間。Har

5、dy-Weinberg平衡的卡方檢測(cè)發(fā)現(xiàn),大多數(shù)位點(diǎn)偏離平衡狀態(tài)。兩兩品系之間的Fst值在0.005—0.269之間,兩兩品系間的遺傳距離為0.0520-0.0980。
　　 3.應(yīng)用甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性(MSAP)技術(shù)對(duì)4個(gè)文蛤品系胞嘧啶甲基化模式和程度進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果表明,文蛤品系基因組的CCGG序列中檢測(cè)到26.7％-30.0％的DNA發(fā)生甲基化,40對(duì)擴(kuò)增引物篩出有9對(duì)顯示有多態(tài)性,9對(duì)引物擴(kuò)增共得到396條帶,平均甲基化