豬瘟病毒EO蛋白單克隆抗體的制備及其膠體金免疫層析檢測方法的初步探索.pdf

1、豬瘟(Classical Swine Fever, CSF)，是危害我國養(yǎng)豬業(yè)的最重要的一種高度接觸性烈性傳染病之一，多年來被列為我國豬病防治研究的首要對象之一。世界上各國都采取了許多措施較好地控制了豬瘟的大規(guī)模爆發(fā)流行，但自上世紀70年代末以來，豬瘟的流行與發(fā)病特點發(fā)生了很大的變化，近年來我國豬瘟的發(fā)生又呈上升趨勢，臨床表現(xiàn)更為復雜，而且免疫豬群發(fā)生豬瘟越來越多。
　　 根據(jù)豬瘟病毒中國C株的全基因組序列，分別設計擴增該病毒主

2、要結構蛋白基因E0全長的相應引物，利用RT-PCR技術對目的基因進行了擴增，獲得了714bp的基因片段。再將目的基因與pET-28a載體連接，構建高效表達重組載體pET28a-C-E0。轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，重組子經(jīng)酶切和測序鑒定正確后進行誘導表達。IPTG誘導表達后進行SDS-PAGE電泳檢測。結果表明融合蛋白在37℃下，1.0 mmol/L的IPTG濃度誘導下能良好表達，并且，融合蛋白均以包涵體的形式存在。用鎳柱純化包涵體

3、后能獲得較純的融合蛋白。
　　 用純化的E0抗原免疫BALB/c小鼠，制備脾細胞，與SP2/0骨髓瘤細胞系融合，獲得2株能穩(wěn)定分泌抗CSFV E0蛋白的單克隆抗體雜交瘤細胞株，分別命名為E01，和E02，抗體亞類為IgG2bκ，誘生腹水的抗體效價分別為1∶128000、1∶256000。間接ELISA檢測特異性表明，2株單克隆抗體與其他2種豬類病毒無交叉反應。本實驗為進一步研制CSFV中和單抗治療劑和快速檢測試劑盒奠定了基礎。<