鵝細(xì)小病毒抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試紙條的研制.pdf

1、小鵝瘟（Gosling plague，GP）是由細(xì)小病毒科、依賴病毒屬中的鵝細(xì)小病毒（Goose Parvovims，GPV）引起的一種烈性傳染病，主要侵害4日齡至20日齡內(nèi)的雛鵝和雛番鴨，引起急性腸炎及肝、腎、心等實(shí)質(zhì)臟器敗血性病變，尤其以小腸部位的纖維性、栓塞性病變?yōu)橹饕卣?，發(fā)病率和死亡率可高達(dá)90％以上。目前，此病每年都有不同程度的流行，是養(yǎng)鵝及番鴨地區(qū)最主要的傳染病之一，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。由于本病長(zhǎng)期困擾著養(yǎng)鵝業(yè)的發(fā)展，所

2、以需要一種準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的快速診斷方法來(lái)對(duì)該病作出早期診斷。
　　 膠體金免疫層析（GICA）技術(shù)正是一種簡(jiǎn)易、快速的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，自從20世g90年代初由Beggs等用于人絨毛膜促性腺激素（HCG）的測(cè)定以來(lái)，在很多領(lǐng)域都有應(yīng)用，如激素或疾病有關(guān)蛋白的檢測(cè)；病原微生物有關(guān)蛋白或抗原抗體的檢測(cè)；寄生蟲(chóng)相關(guān)抗原、抗體的檢測(cè)；血、尿藥物濃度的監(jiān)測(cè)。但目前仍沒(méi)有應(yīng)用此技術(shù)檢測(cè)鵝細(xì)小病毒抗體的報(bào)道，而由于此技術(shù)的特性，將其應(yīng)用于鵝細(xì)小病毒

3、抗體的快速檢測(cè)，將對(duì)養(yǎng)鵝業(yè)的健康發(fā)展產(chǎn)生重要影響。
　　 GPV-VP3蛋白是病毒的主要衣殼蛋白，約占衣殼蛋白總含量的80％，暴露于病毒粒子表面的氨基酸序列均出現(xiàn)在VP3蛋白多肽鏈內(nèi)，且VP3內(nèi)含有GPV主要抗原決定簇成分，是GPV主要免疫保護(hù)性抗原，能特異性結(jié)合自然感染鵝血清中的抗體，因此，其能夠作為金標(biāo)記抗原，捕獲抗體。本研究用檸檬酸鈉-氯金酸氧化還原法制備18nm膠體金顆粒，標(biāo)記鵝細(xì)小病毒（GPV）VP3重組蛋白制作金標(biāo)墊

4、，檢測(cè)線的捕獲抗體為兔抗鵝IgY多克隆抗體，質(zhì)控線的捕獲抗體為兔抗VP3多克隆抗體，組裝膠體金免疫層析試紙條，檢測(cè)鵝細(xì)小病毒抗體，并利用Point-of-caretesting（POCT）scanner，進(jìn)行定量研究，最低檢出量為9.89ng/mL。制得的試紙條與瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）相比，符合率分別為100％、97.7％。
　　 由于本研究的試紙條特異性強(qiáng)、敏感性高、簡(jiǎn)便快速、重復(fù)性好，所以其可