抗小鵝瘟病毒單克隆抗體的制備及膠體金免疫層析試紙條的研制.pdf

1、小鵝瘟是由細(xì)小病毒科、依賴病毒屬中的鵝細(xì)小病毒引起的一種高度接觸性和敗血性傳染病，主要侵害4～20日齡內(nèi)的雛鵝和雛番鴨，引起急性腸炎及肝臟、腎臟、心臟等實(shí)質(zhì)臟器敗血性病變，尤其以小腸部位的纖維性、栓塞性病變?yōu)橹饕卣鳎l(fā)病率和死亡率可高達(dá)90％以上。目前，此病每年都有不同程度的流行，是養(yǎng)鵝及番鴨地區(qū)最主要的傳染病之一，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。因該病主要感染雛鵝和雛番鴨，所以，該病的早期診斷顯得極為重要。
　　 本試驗(yàn)用GPV南京分離

2、株（NJ株）接種非免疫鵝胚，將收獲的病毒尿囊液與等量氯仿混合，除去雜蛋白，加入氯化鈉使其濃度達(dá)到2.2％，用終濃度6％PEG-6000將絕大部分病毒沉降下來，通過蔗糖密度梯度超速離心對病毒進(jìn)行純化。經(jīng)PCR檢測及電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)病毒主要分布在35％～50％蔗糖濃度之間，病毒的蛋白含量為216μg/ml，SDS-PAGE電泳分析，證明病毒的純度達(dá)到90％以上，達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。
　　 將提純濃縮后的小鵝瘟病毒用甲醛滅活，免疫6周齡BAL

3、B/c雌性小鼠，制備免疫脾細(xì)胞，與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)間接ELISA篩選，獲得3株能穩(wěn)定分泌抗小鵝瘟病毒單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為1E12、2H11和3F1。腹水效價(jià)分別為1∶32000、1∶80000和1∶16000;間接免疫熒光試驗(yàn)證明該三株單抗均有良好的特異性;westernblot證明這三株單抗均針對鵝細(xì)小病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP3。
　　 選取效價(jià)高的單克隆抗體2H11進(jìn)行純化，制備金標(biāo)抗體玻璃纖維素膜;將純