鵝源副黏病毒病單克隆抗體的制備及膠體金快速診斷試紙條的研制.pdf

1、本實驗建立了檢測鵝副黏病毒的快速夾心膠體金免疫層析測試試紙條(ICS)。全文共分為兩部分： 第一部分，制備鵝副黏病毒的單克隆抗體。采用PEG沉淀法結合SephdexG200層析柱法提純強毒JG04株GPMV,蛋白含量為1.283mg/mL，HA效價為29～10。提純的GPMV用于免疫小鼠和ELISA包埋；采用PEG1500進行融合，融合率為46.5﹪；采用間接ELISA試驗和HI試驗雙向檢測雜交瘤細胞分泌的抗體，陽性率為78.4

2、﹪；采用有限稀釋法進行三次克隆，獲得兩株穩(wěn)定分泌抗JG04株鵝副黏病毒抗體的雜交瘤細胞株，命名為3A5、2C6。其中3A5腹水的ELISA效價為1∶51200，沒有HI效價；2C6腹水的ELISA效價為1∶6400，HI效價為27。 第二部分，制備快速夾心膠體金免疫層析檢測試紙條。采用檸檬酸鈉還原法制備膠體金；將提純的雞IgG(抗JG04株GPMV)噴涂在NC膜上，檢測線(T)；將金標3A5作為檢測試劑，噴涂在玻璃纖維上。在加樣

3、處沾取含有GPMV的尿囊液樣品，GPMV與金標3A5結合形成混合液，由于層析原理，混合液向上移動，在檢測線(T)上混和液中與金標顆粒結合的GPMV與雞IgG結合，由于大量GPMV沉積在檢測線上，出現(xiàn)紅線；而如果尿囊液中不含有GPMV，檢測線上不出現(xiàn)紅線。 該試紙條不與AIV、EDSV、IBDV、IBV、GPV、CELO的尿囊液和MV、CDV發(fā)生交叉反應，說明該試紙條有較高的特異性。用該試紙條對GPMV、孔雀源NDV毒株，鴿源ND

4、V毒株、新城疫Lasota株、雞源NDV的尿囊液進行檢測，均為陽性。證明其不僅與GPMV發(fā)生反應，還可以與不同易感動物源的NDV發(fā)生反應，可以廣泛的應用到NDV的多種易感動物的檢測。 GPMV膠體金免疫層析試紙條以免疫層析法為基礎，利用抗原—抗體的特性，用一種新奇的方式進行快速診斷。由于這種方法快速、簡便，易保存，不需要專業(yè)人員和特殊儀器，大大縮短了常規(guī)實驗室檢測所需時間，特別適合于廣大基層單位、醫(yī)院、野外作業(yè)人員以及大批量時間