牛泡沫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白Bet及BTas對(duì)病毒復(fù)制影響的研究.pdf

1、泡沫病毒(foamy viruses，F(xiàn)V)，在分類(lèi)上屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科泡沫病毒亞科泡沫病毒屬，為一類(lèi)特殊的復(fù)雜反轉(zhuǎn)錄病毒。其基因組為二聚線狀單鏈RNA，基因組的結(jié)構(gòu)組成與順序同典型的反轉(zhuǎn)錄病毒相似。前病毒兩端具有長(zhǎng)末端重復(fù)序列(long terminal repeat, LTR)，中間為結(jié)構(gòu)基因gag、pol、env。與典型反轉(zhuǎn)錄病毒不同的是泡沫病毒在env與3'LTR之間存在內(nèi)部啟動(dòng)子(internal promoter,IP)，負(fù)責(zé)

2、啟動(dòng)下游非結(jié)構(gòu)基因tas，bet等的轉(zhuǎn)錄。
　　 牛泡沫病毒(bovine foamy virus，BFV)是該屬病毒的一員，在非靈長(zhǎng)類(lèi)泡沫病毒中研究的相對(duì)清楚。本室一直致力于對(duì)自主分離出的毒株BFV3026進(jìn)行研究，證實(shí)BTas(BFV trans-activator of spumavirus)為BFV的反式激活因子，并對(duì)其展開(kāi)功能研究。同時(shí)確證了BFV中存在Bet蛋白，證明其可抑制BTas對(duì)LTR和IP啟動(dòng)子的反式激活。這

3、提示在病毒的調(diào)節(jié)機(jī)制中Bet蛋白可能發(fā)揮了一種負(fù)調(diào)控的作用。本文在前人研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對(duì)BFV的兩種非結(jié)構(gòu)蛋白Bet及BTas在病毒整體水平對(duì)其在病毒復(fù)制中所發(fā)揮的功能進(jìn)行探索。
　　 本文首先成功構(gòu)建了Bet缺失的BFV3026感染性克隆pBS-BFV-△Bet，用其轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后與BFVL指示細(xì)胞系共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)該感染性克隆與野生型相比對(duì)LTR激活能力增強(qiáng)，進(jìn)一步通過(guò)免疫印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Bet缺失的BFV3026感染性克隆與

4、野生型相比BTas蛋白及Gag蛋白的表達(dá)量均有增加。說(shuō)明缺失Bet使得病毒滴度上升，證明在病毒水平Bet作為負(fù)調(diào)控因子影響了病毒的復(fù)制。隨后本文構(gòu)建了Bet穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系Cf2Th-Bet，進(jìn)一步對(duì)Bet蛋白的功能展開(kāi)研究，本文發(fā)現(xiàn)在Cf2Th-Bet細(xì)胞中，BFV3026病毒及該病毒感染性克隆的復(fù)制均受到了一定程度的抑制，該結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了Bet具有負(fù)調(diào)控的作用。
　　 本文同時(shí)構(gòu)建了缺失BTas的感染性克隆pBS-BFV-△