LPS抑制小鼠和肉雞食欲的機(jī)制研究.pdf

1、本試驗(yàn)以LPS誘導(dǎo)的厭食肉雞為模型，分別對(duì)其多條作用通路進(jìn)行探索試圖尋找出一個(gè)可以干擾由炎癥反應(yīng)引發(fā)的食欲下降的關(guān)鍵因子。下丘腦作為采食調(diào)控的關(guān)鍵位置，存在大量的食欲基因和蛋白，試驗(yàn)采用腦室注射的方法，阻斷其中一條通路，檢測(cè)其厭食效果及炎癥反應(yīng)是否被削弱，從而為改善動(dòng)物采食情況提供理論依據(jù)。
　　試驗(yàn)一:選取體重相近的10日齡AA肉雞32只隨機(jī)分為4組，按照肉雞飼養(yǎng)手冊(cè)控制濕度和溫度，肉雞可進(jìn)行自由飲水和采食，單籠單飼。試驗(yàn)前，所

2、有組禁食24h后，分別按照濃度梯度0，0.5，1，2mg/kg體重的劑量腹腔注射LPS。記錄24h的采食量及96h的體重變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn):LPS處理的濃度在0.5mg/kg的時(shí)候就足以引起動(dòng)物采食下降，且采食量在4小時(shí)開始與對(duì)照組差異顯著，隨著LPS濃度的增加并未發(fā)現(xiàn)存在劑量依賴性。為之后試驗(yàn)的處理劑量和采樣時(shí)間提供參考。
　　試驗(yàn)二:選取體重相近的10日齡的AA肉雞24只，隨機(jī)分為2組，按照肉雞飼養(yǎng)手冊(cè)控制濕度和溫度，肉雞可進(jìn)行自

3、由飲水和采食，單籠單飼。試驗(yàn)前，所有組禁食24h后，分別按照0，0.5mg/kg體重的劑量腹腔注射LPS。注射LPS4h后，將肉雞斷頭，迅速剝離下丘腦，測(cè)定下丘腦內(nèi)的食欲基因，炎癥因子的mRNA水平以及食欲相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):LPS處理顯著促進(jìn)了炎癥因子IL-1β的釋放，且顯著抑制了誘食基因AgRP的表達(dá);利用Western Blotting技術(shù)檢測(cè)NF-κB、AMPK、mTOR、FoxO1信號(hào)通路的磷酸化水平，LPS處理激活了炎

4、癥因子作用靶點(diǎn)NF-κB和mTOR通路，顯著升高了FoxO1的磷酸化水平，抑制了FoxO1的活性，而LPS處理未對(duì)AMPK產(chǎn)生影響。結(jié)果可以看出，LPS處理促進(jìn)炎癥因子的釋放作用于NF-κB，從而引起采食量的變化，mTOR通路可能參與LPS誘導(dǎo)的動(dòng)物厭食行為。
　　試驗(yàn)三:選取體重相近的10日齡的AA肉雞64只，隨機(jī)分為A、B、C、D共4個(gè)組，按照肉雞飼養(yǎng)手冊(cè)控制濕度和溫度，肉雞可進(jìn)行自由飲水和采食，單籠單飼。試驗(yàn)前，所有組禁食2

5、4h后，A組和C組腦室注射濃度為25mg/ml的mTOR阻斷劑Rapamycin2μl;B組和D組注射溶劑2μl DMSO。腦室注射1小時(shí)后，按照0.5mg/kg體重的劑量腹腔注射LPS，每組8只用作記錄24h的采食量。另8只在注射LPS4h后，將其斷頭，迅速剝離下丘腦，用于樣品的分析。測(cè)定下丘腦內(nèi)的食欲基因，炎癥因子的mRNA水平以及食欲相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):腦室注射Rapamycin后再進(jìn)行LPS的腹腔注射，可以緩解動(dòng)物的采食量