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文檔簡介
1、白靈側(cè)耳(Pleurotus eryngii var.moliensis C.J.Mou)營養(yǎng)豐富、藥用價值高,深受人們喜愛,但由于生長周期長、菇蕾發(fā)育同步性差、畸形菇嚴(yán)重,致使栽培經(jīng)濟效益較低,嚴(yán)重影響了其產(chǎn)業(yè)發(fā)展。因此培育原基發(fā)生早、原基發(fā)生整齊的新品種已成當(dāng)務(wù)之急。在傳統(tǒng)育種的基礎(chǔ)上結(jié)合并發(fā)揮分子育種的優(yōu)勢加快育種進度成為必然。闡明白靈側(cè)耳結(jié)實的分子機理是開展分子輔助育種首要解決的問題,而結(jié)實分子機理研究的第一步就是尋找與其結(jié)實相
2、關(guān)的關(guān)鍵基因。
本研究以白靈側(cè)耳菌絲和原基為材料,利用LiCl沉淀法對兩階段的RNA進行提取并純化,然后利用3條錨定引物和26條隨機引物組成的78個引物組合對兩個發(fā)育階段cDNA進行差異顯示PCR擴增,并用非變性的聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)對兩發(fā)育階段的差異片段進行篩選,對獲得的差異片段進行切膠回收并純化,將純化片段克隆測序后重新設(shè)計引物,并以beta-actin基因為內(nèi)參基因,采用半定量PCR的方法驗證差異片段的真實
3、性,最后應(yīng)用生物信息學(xué)方法對真實的差異片段進行同源性分析并對基因功能進行預(yù)測。
引物篩選結(jié)果表明,78個引物組合中,錨定引物H-T11A組成的引物對擴增出的差異條帶最多,效果最好,其余兩個效果較差。
結(jié)實相關(guān)基因片段克隆及序列分析結(jié)果顯示,在菌絲和原基兩個發(fā)育階段中最終共獲得8條差異片段,差異條帶大小多在200-500bp之間。1條與未知蛋白具有40%氨基酸同源性的基因片段在菌絲中高表達,其余7條在原基中高表
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