NtNAC-R1介導(dǎo)煙株打頂誘導(dǎo)煙堿生物合成過程.pdf

1、根系是煙堿的合成部位。煙株打頂后，煙草根系煙堿合成能力增強(qiáng)，已是不爭之實(shí)。然而煙株打頂所導(dǎo)致煙葉中煙堿含量升高及調(diào)節(jié)機(jī)制并不清楚。為研究煙堿生物合成的分子調(diào)控機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建了煙株打頂前、后根尖組織的SSH-cDNA文庫，從中篩選出一些相關(guān)基因的EST序列。本論文是以SSH-cDNA文庫中篩選并克隆得到NtNAC-R1基因?yàn)檠芯繉ο?，對該基因進(jìn)行了內(nèi)含子鑒定和亞細(xì)胞定位和瞬時表達(dá)分析;并進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化分析其在激素信號傳導(dǎo)及煙堿生物合成中

2、的調(diào)控作用。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)驗(yàn)證了NtNAC-R1基因與煙堿合成關(guān)鍵酶基因PMT之間的關(guān)系:與不打項(xiàng)煙株相比，打頂24h根尖組織中的NtNAC-R1和PMT基因表達(dá)都上調(diào)，表明NtNAC-R1轉(zhuǎn)錄因子與煙株打頂刺激根系煙堿的生物合成相關(guān)。
　　(2)以煙草基因組DNA為模板，克隆NtNAC-R1基因與以cDNA為模板克隆NtNAC-R1基因序列比對分析顯示，該基因含有兩個內(nèi)含子，大小分別為613bp和97bp，

3、具有典型的GU…AG內(nèi)含子剪切特征，內(nèi)含子區(qū)域富含AU，屬于U2-型內(nèi)含子。
　　(3)對NtNAC-R1轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行了亞細(xì)胞定位分析:構(gòu)建了pS1300-NtNAC-R1-GFP融合表達(dá)載體，瞬時轉(zhuǎn)化煙草葉片亞細(xì)胞定位檢測證明該轉(zhuǎn)錄因子定位在細(xì)胞核。
　　(4)分析了NtNAC-R1基因?qū)A和IAA信號途徑的響應(yīng):建立瞬時表達(dá)分析體系，RT-PCR檢測結(jié)果顯示NtNAC-R1基因過表達(dá)，PMT表達(dá)量升高，JA信號途徑標(biāo)志