TMV和PVX侵染后煙草和番茄中FdI及IP-L的表達分析.pdf

1、植物病毒與寄主互作是一個非常復(fù)雜的過程，其相互作用機制和效應(yīng)一直是一個重要的研究熱點。煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）是多數(shù)農(nóng)作物病毒病的主要病原之一。實驗室前期利用酵母雙雜交系統(tǒng)，用與TMV血清學(xué)關(guān)系密切的ToMV CP作為誘餌蛋白篩選煙草文庫，獲得了一個與CP相互作用的FdI。另外，張等人通過酵母雙雜交系統(tǒng)篩選到的另一個與ToMV CP互作的煙草蛋白IP-L，雙分子熒光互補技術(shù)也表明了ToMV CP與

2、IP-L在植物體內(nèi)也可以發(fā)相互作用。后來實驗證實這兩個蛋白均與TMV CP存在互作，其中FdI還可以與馬鈴薯X病毒（Potato virus X,PVX）的CP互作。那么FdI以及IP-L是否存在于除了煙草之外其他茄科作物中？其同源性如何？它們在病毒侵染前后的表達變化如何？這些問題的回答對于更好的理解TMV和PVX與寄主互作的生物學(xué)效應(yīng)具有重要參考價值。
　　本實驗中我們也對不同煙草品系以及幾種典型的茄科作物葉片中的FdI以及IP

3、-L進行檢測，選取了4種煙草品系和3種茄科作物，通過提取總RNA，經(jīng)過RT-PCR，進行克隆分析。結(jié)果證實了在這4種煙草品系中均檢測到了FdI和IP-L，在茄子、番茄、辣椒中檢測到了IP-L，茄子和番茄中檢測到了FdI。通過序列對比分析，F(xiàn)dI在這些植物葉片中核苷酸序列的同源性為95.1％～100％，而IP-L核苷酸序列同源性為88.4％～100％，氨基酸序列的同源性差異也不大。
　　另外，運用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測病毒的報道

4、已有很多，還有關(guān)于檢測植物病毒與寄主互作基因表達變化的研究。因此，我們也將通過實時熒光定量PCR技術(shù)，分析FdI和IP-L這兩個基因在病毒侵染后表達量的變化。我們選取了云煙和番茄，分別接種TMV和PVX，設(shè)置了25℃、30℃、35℃的溫度恒溫培養(yǎng)，另外光照和黑暗處理，在接種病毒23天時通過RT-PCR檢測到是否已經(jīng)接種上病毒，并結(jié)合云煙和番茄接種TMV、PVX后以及健康葉片通過實時熒光定量PCR篩選了內(nèi)參基因，根據(jù)geNormPlus軟