煙草種子和土壤攜帶三種病毒對(duì)煙苗的侵染分析.pdf

1、煙草，為茄科（Solanaceae）煙屬（Nicotiana）一年生或有限多年生草本植物，是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物之一，而煙草業(yè)在我國經(jīng)濟(jì)中也占據(jù)著重要的地位，每年為國家和地方的財(cái)政收入均作出了巨大貢獻(xiàn)。目前，由煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）、黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）以及馬鈴薯Y病毒（Potato virus Y，PVY）引起的煙草花葉病毒病是各大煙區(qū)的主要病害之一

2、，已成為提高煙葉產(chǎn)量和質(zhì)量的主要限制因子，也嚴(yán)重影響了煙草業(yè)的發(fā)展。為了明確以上三種病毒在煙草種子和土壤帶毒情況下對(duì)煙苗的侵染情況，為煙草生產(chǎn)實(shí)踐提供參考，本研究主要進(jìn)行了以下幾方面研究。
　　1、利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR，對(duì)煙草感病葉片中的三種病毒的拷貝數(shù)進(jìn)行了定量。本研究根據(jù)三種病毒克隆后的陽性質(zhì)粒測序得到的序列在 NCBI里比對(duì)后相似度達(dá)95％以上的序列分別設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR特異引物，將克隆后的陽性質(zhì)粒DNA以10倍梯度稀

3、釋6次作為模板建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定了三種病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法及反應(yīng)條件的合理性、可靠性；其中，本試驗(yàn)定量得到的三種病毒的拷貝數(shù)分別為TMV：3.72×1010copies/μL，CMV：3.68×1010 copies/μL，PVY：3.76×1010 copies/μL。
　　2、利用已知病毒拷貝數(shù)的病毒汁液磷酸緩沖液浸泡處理種子，不同時(shí)間段育苗分析了煙苗感染病毒的陽性率。結(jié)果表明，種子攜帶三種病毒后，TMV對(duì)煙苗的侵染

4、能力最強(qiáng)，其次為CMV，再次為PVY；病毒在種子上保持侵染活性的時(shí)間PVY要強(qiáng)于 TMV和 CMV。本研究中分別用病毒含量為3.72×108 copies/μL、3.68×108 copies/μL、3.76×108 copies/μL的病毒汁液處理后，室溫放置3個(gè)月，煙苗中無TMV和CMV檢測到，放置5個(gè)月后，十字期煙苗中TMV、CMV、PVY三種病毒均未檢測到。
　　3、明確了三種病毒均可以通過根部感染煙苗。本研究通過病毒汁液

5、磷酸緩沖液浸根實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，5個(gè)不同病毒含量的病毒汁液浸根處理之后，均可使十字期煙苗感染三種病毒。其中分別用病毒含量為3.72×108 copies/μL、3.68×108 copies/μL、3.76×108 copies/μL的病毒汁液浸根處理后，ELISA檢測三種病毒的陽性率分別在40%、26.67%、17.78%以上，而 RT-PCR檢測三種病毒的陽性率分別在90%、30%、20%以上，這也表明了RT-PCR檢測要比ELISA檢測更

6、靈敏。
　　4、明確了除TMV和CMV可以通過土壤傳播外，PVY也可以通過土壤傳播，但三種病毒在土壤中的存活期限存在差異，其中TMV存活時(shí)間最長，其次為CMV，PVY的存活時(shí)間最短，初步得出用病毒含量為3.72×108 copies/μL病毒汁液處理后，TMV在土壤中至少可以存活5個(gè)月，而CMV和PVY在土壤中的存活時(shí)間相對(duì)較短。不論是育苗基質(zhì)帶毒處理后不同時(shí)間段育苗還是不同時(shí)間段采集的大田土樣育苗，十字期煙苗感染病毒的檢測結(jié)果均