小鼠未成熟卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型及其與體外成熟能力和發(fā)育能力關(guān)系的研究.pdf

1、堡壁小鼠圭成熟卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型及其與成熟能力，發(fā)育能力關(guān)系的研宄碩士論文摘要目前越來(lái)越多的證據(jù)表明體外成熟培養(yǎng)前卵泡卵母細(xì)胞發(fā)育階段的差異可能是卵母細(xì)胞體外成熟系統(tǒng)不完善的原因之一，這首先反映在未成熟卵母細(xì)胞核染色質(zhì)構(gòu)型就存在差別。本論文駔小鼠為動(dòng)物模型，對(duì)卵子發(fā)生期間核染色質(zhì)構(gòu)型的變化以及這些構(gòu)型與排卵、成熟、受精和發(fā)育的關(guān)系進(jìn)行了初步研究r結(jié)果如下：1)成鼠卵巢有腔卵泡內(nèi)的卵母細(xì)胞拔有四種染色質(zhì)構(gòu)型：sN、NSN、pSN、DNsN

2、。其中主要是SN和NSN型，pSN和pNSN的比例相對(duì)很少；2)17日齡幼年小鼠開(kāi)始出現(xiàn)SN型卵母細(xì)胞，18、19日齡時(shí)SN型卵母細(xì)胞比例顯著增加；3)直徑小于60pm的卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型均為NSN型，卵母細(xì)胞生長(zhǎng)到直徑為609m以上時(shí)，卵母細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)SN染色質(zhì)構(gòu)型：當(dāng)直徑達(dá)至q7080pm時(shí)，SN型卵母細(xì)胞比例明顯增加：直徑小于70um的卵母細(xì)胞pSN和pNsN染色質(zhì)構(gòu)型比率高于直徑7080pm的卵母細(xì)胞；4)68周齡小鼠經(jīng)PMSG

3、處理后，直徑60701tin的NSN型卵母細(xì)胞減少7080urn的SN型卵母細(xì)胞顯著增加；經(jīng)hCG處理后，直徑7080om的SN型卵母細(xì)胞的比率比只注射PMSG組減少，SN型卵母細(xì)胞比率又回到了捧卵前水平：5)SN型和NSN型卵母細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)都能自發(fā)發(fā)生GVBD，并且可成熟到M11期；但是，SN型卵母細(xì)胞的減數(shù)分裂能力(GVBD和發(fā)育至MII期的能力)優(yōu)于NSN型卵母細(xì)胞：6)從發(fā)育上看，體外成熟到M11期的sN型卵母細(xì)胞和NSN型

4、卵母細(xì)胞的受精率沒(méi)有明顯差異；但SN型卵母細(xì)胞的2細(xì)胞發(fā)育率高于NSN型卵母細(xì)胞；7)不同鼠齡的小鼠經(jīng)PMSG處理后，其SN型卵母細(xì)胞的比率沒(méi)有差異，但是青年小鼠hCG作用后比PMSG處理后的SN型卵母細(xì)胞減少155％，但是年老的小鼠則只減少了28％：、8)隨著年齡的增加，在卵巢表面有腔卵泡中的SN型卵母細(xì)胞的比率增加；／。，關(guān)鍵詞：染色質(zhì)構(gòu)型GV期卵母細(xì)胞小鼠一旦蘭堡塵墨圭塑塑墨塑塞銎魚(yú)堊塑皇絲墨蘭墮苧些壟：莖!墮查叁墨墮堡塞壁主笙苧

5、前言胚胎工程操作如胚胎體外生產(chǎn)、胚胎克隆等研究所需要的大量成熟卵母細(xì)胞主要是由卵母細(xì)胞體外成熟(1vM)提供的盡管許多種動(dòng)物的IVM系統(tǒng)取得了根大的進(jìn)展，目前的ⅣM系統(tǒng)還并不十分完善，這在豬和馬尤為突出側(cè)如母馬卵母細(xì)胞體外成熟比率同其它動(dòng)物相比相對(duì)較低，大約為15％一65％；(Aimdal。1996、1994；Bczardeta1，1997：Brucketa1，1996；Choieta1，1993)；豬的體外成熟率(大約為90％)雖然很

6、高但是豬IVM／IVF胚胎移植后發(fā)育到期的比率也只有5％10％(Funahshieta1，1997’；Abeydeemela1，1998)目前還不十分清楚導(dǎo)致發(fā)育率低的確切原因一些研究者發(fā)現(xiàn)，在豬卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)前，既使嚴(yán)格選擇卵丘細(xì)胞緊密、卵母細(xì)胞胞質(zhì)均勻的卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(COCs)進(jìn)行培養(yǎng)，其第一次減數(shù)分裂雙線(xiàn)期(卵母細(xì)胞核染色質(zhì)構(gòu)型)也有很大的差別甚至從初情期前動(dòng)物同一個(gè)卵巢收集的未成熟卵母細(xì)胞，其卵母細(xì)胞核染色質(zhì)構(gòu)型也不相同

7、(Longeta1，1997)，因而有的研究者推斷有腔卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞核染色質(zhì)構(gòu)型的異質(zhì)性可能是豬卵母細(xì)胞體外成熟結(jié)果差異較大的原因之一(Dingeta1，1994)有的研究者還提出，在體外成熟時(shí)使未成熟卵母細(xì)胞處于同一發(fā)育時(shí)期能提高IM／IVF胚胎的質(zhì)量，并且進(jìn)行了一定的實(shí)驗(yàn)，證明IVId／lvF胚胎的質(zhì)量有所提高(FunahshetaL，1997；Grupcn吐a1，1997；PFatherda1，1998)但是目前還沒(méi)有真正研究清楚

8、有腔卵泡卵母細(xì)胞核染色質(zhì)異質(zhì)性與卵母細(xì)胞質(zhì)量的關(guān)系，因而對(duì)家畜和人的體外成熟、體外受精等領(lǐng)域而言研究有腔卵泡卵母細(xì)胞核染色質(zhì)異質(zhì)性的生理特征具有重要的理論和實(shí)踐意義。11有腔卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型的分類(lèi)關(guān)于有腔卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型的種類(lèi)，不同動(dòng)物不盡相同MotlikandFulka(1976)應(yīng)用醋酸地衣紅壓片染色，觀(guān)察染色質(zhì)、桉仁和核膜消失及hCG注射后生發(fā)泡的變化時(shí)發(fā)現(xiàn)，豬的未成熟卵母細(xì)胞(GV期)有(GVI4)四種染色質(zhì)構(gòu)型

9、關(guān)于有腔卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞核結(jié)構(gòu)的異質(zhì)性在其它動(dòng)物也有研究報(bào)道有關(guān)小鼠有腔卵泡卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型的研究相對(duì)較為詳盡。MtlsonandAlbcrtin(1990)在分析小鼠冷凍切片的基礎(chǔ)上，確定小鼠的前期卵母細(xì)胞經(jīng)歷了l、II、III和Iv四種核仁染色質(zhì)相關(guān)的構(gòu)型t)ebey等(1993)認(rèn)為有腔卵泡中獲得的GV期卵母細(xì)胞可以分為兩種主要的類(lèi)型第一類(lèi)，被命名為。SN”型(圍繞核仁型，surrounednucleolus)，染色質(zhì)較凝集，并圍

10、繞在“核仁樣小體”周?chē)?nucleoluslikebody，HIB)(這里用。NLB”這一術(shù)語(yǔ)代替“核仁”是因?yàn)橥耆L(zhǎng)大的卵母細(xì)胞的核仁具有特定的電鏡結(jié)構(gòu)和功能)：另一類(lèi)是染色質(zhì)彌散，核仁樣小體沒(méi)有染色質(zhì)圍繞被命名為。NSN“型(未圍繞核仁型，nonsmrmmednucleolus)。中間型有兩種，一種是在核仁樣小體對(duì)側(cè)聚合著一塊凝集的染色質(zhì)，被稱(chēng)之為口NsN型(pardyNSN)，另一種是有部分染色質(zhì)圍繞著核仁樣小體，披稱(chēng)之為pSN型