Ezrin對(duì)小鼠卵母細(xì)胞體外成熟的影響.pdf

1、Ezrin是ERM蛋白家族一員，在多種細(xì)胞中橋接細(xì)胞骨架與質(zhì)膜，參與細(xì)胞形態(tài)維持、細(xì)胞粘附、細(xì)胞遷移及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種細(xì)胞功能。有研究表明該家族蛋白參與了小鼠卵母細(xì)胞皮層緊張度的調(diào)控及第二次成熟分裂時(shí)紡錘體的定位。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，小鼠GV期到MII期的卵母細(xì)胞均有Ezrin及其磷酸化修飾的活性形式存在，但其在小鼠卵母細(xì)胞成熟過(guò)程究竟發(fā)揮什么作用尚不清楚。本試驗(yàn)以小鼠GV期裸卵為材料，通過(guò)顯微注射特異性siRNA敲低Ezrin的方法研究

2、了該蛋白在小鼠卵母細(xì)胞發(fā)育成熟中的作用以及對(duì)受精后胚胎發(fā)育潛力的影響。研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如下：
　　1.顯微注射Ezrin-siRNA后不同時(shí)間小鼠GV期裸卵內(nèi)Ezrin的表達(dá)水平
　　向小鼠GV期裸卵顯微注射Ezrin-siRNA或NC-siRNA（陰性對(duì)照），在含Milrinone（抑制細(xì)胞核分裂）M2中分別抑制0 h、6 h、12 h、18 h、24 h、30 h和36 h后，用Ezrin特異性抗體進(jìn)行熒光染色并用Imag

3、e J軟件分析所獲圖片的平均熒光值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在顯微注射后18～30 h期間，試驗(yàn)組Ezrin表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。
　　2.Milrinone阻滯不同時(shí)間對(duì)小鼠GV期裸卵體外成熟率的影響
　　將小鼠GV期裸卵在Milrinone培養(yǎng)液中分別阻滯0 h（對(duì)照組）、6 h、12 h、18 h、24 h、30 h和36 h后，統(tǒng)計(jì)各組卵母細(xì)胞成熟率（以排出PBI計(jì)）。結(jié)果顯示，阻滯時(shí)間≤18 h，各組卵母細(xì)胞成熟

4、率與對(duì)照組無(wú)顯著差異（P＞0.05）；阻滯時(shí)間≥24 h，則卵母細(xì)胞成熟率顯著低于對(duì)照組及阻滯時(shí)間≤18 h的各試驗(yàn)組（P＜0.05）。
　　3.敲低Ezrin對(duì)小鼠卵母細(xì)胞細(xì)胞體外成熟的影響
　　向小鼠GV期裸卵中顯微注射Ezrin-siRNA或NC-siRNA（陰性對(duì)照）后，Milrinone阻滯18 h再繼續(xù)成熟培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：敲低Ezrin蛋白后，小鼠卵母細(xì)胞體外成熟率顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；皮層顆粒（cor

5、tical granule,CGs）異常分布率及MII期紡錘體位置異常率顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；表面微絨毛長(zhǎng)度顯著降低（P＜0.05），密度極顯著降低（P＜0.01）。
　　4.敲低Ezrin后對(duì)小鼠卵母細(xì)胞IVF的影響
　　分別取試驗(yàn)組（GV期注射Ezrin-siRNA）和對(duì)照組（GV期注射NC-siRNA）所獲得的小鼠MII期卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精（IVF），結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與對(duì)照組相比，GV期敲低Ezrin導(dǎo)致小鼠成熟