BL-I對小鼠卵母細(xì)胞體外成熟的影響.pdf

1、目的研究丁內(nèi)酯-I(BL-I)對昆明系小白鼠卵母細(xì)胞體外成熟、發(fā)育能力及超微結(jié)構(gòu)、染色質(zhì)構(gòu)型的影響.方法第一部分:將小鼠卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合物(COC)用含有不同濃度BLI(0、6.25、12.5、25、50、100μmol/L)的培養(yǎng)液培養(yǎng),按培養(yǎng)時間分為3h組和6h組.在BL-I培養(yǎng)液中培養(yǎng)結(jié)束時,先觀察卵母細(xì)胞生發(fā)泡破裂(GVBD)的發(fā)生率,再將卵母細(xì)胞挪入不含BL-I的培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng),觀察成熟動力學(xué)的變化,即卵母細(xì)胞GVBD過程

2、和第一極體形成過程,以得到抑制卵母細(xì)胞核成熟3h或6h所需的BL-I最低有效濃度;第二部分:將小鼠COC分為實(shí)驗(yàn)組和對照組.實(shí)驗(yàn)組用"兩步法"培養(yǎng)小鼠COC,即用6.25μmol/L和100μmol/L的BLI培養(yǎng)液分別抑制COC3h和6h后,挪入成熟培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng).對照組包括COC自然體外成熟組、二甲亞砜(DMSO)暴露組、體內(nèi)成熟組三組.將成熟的卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精,觀察受精率和囊胚形成率并進(jìn)行組間比較.第三部分:將100μ mol

3、/LBL-I培養(yǎng)液培養(yǎng)6h前后的卵母細(xì)胞分別固定作為對照組和實(shí)驗(yàn)組,制作電子顯微鏡標(biāo)本及Hochest33342染色標(biāo)本,比較BL-I作用前后超微結(jié)構(gòu)及染色質(zhì)構(gòu)型的變化.結(jié)論6.25μmol/L及以上濃度BL-I能在一定時間內(nèi)有效抑制小鼠未成熟卵恢復(fù)減數(shù)分裂,而且抑制作用解除后,成熟能力不受影響,但成熟動力學(xué)發(fā)生顯著的變化,GVBD和第一極體的形成過程明顯加速.6.25μmol/LBL-I抑制核成熟3h可顯著提高小鼠未成熟卵的發(fā)育能力.