雞流行性腹瀉病原的分離鑒定及特性研究.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文雞流行性腹瀉病原的分離鑒定及特性研究姓名：馮濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：刁有祥2002.6.1馮濤：雞流行性腹瀉病原的分離鑒定及其特性研究引言雞流行性腹瀉是我省新發(fā)生的一種雞的傳染性疾病，該病主要發(fā)生于春夏交界時(shí)的產(chǎn)蛋雞，雛雞、肉雞也有感染，全省各地均有發(fā)生。其特征性癥狀為持續(xù)性水瀉I l 】，糞便稀薄，持續(xù)時(shí)間約～個(gè)月，病雞采食正常，但飲水增多，發(fā)病前期產(chǎn)蛋率一般不受影響，但發(fā)病后期產(chǎn)蛋率下降

2、，軟殼蛋、無殼蛋增多u l 。產(chǎn)蛋雞發(fā)病后一般沒有死亡，但雛雞感染后約有7 ～1 0 ％的死亡；肉用雞感染后可見嚴(yán)重的腹瀉和脫水，生長(zhǎng)發(fā)育遲緩及持續(xù)升高的死亡等。由于該病發(fā)生后，易繼發(fā)大腸桿菌、沙門氏菌等細(xì)菌感染，而使死亡率和治療費(fèi)用增加，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)危害較大。研究結(jié)果表明，該病的病原為禽輪狀病毒( A v i a n R o t a v i r u s ) 。1 9 7 7 年美國(guó)學(xué)者B e r g l 柚d 等【2 憎次報(bào)道了在火雞水樣

3、糞便和腸內(nèi)容物中發(fā)現(xiàn)了禽輪狀病毒，并認(rèn)為這是引起火雞腸炎的主要病原。之后，他們又在雞、山雞、家鴨等禽類中鑒定了此病毒。英國(guó)瑚、比利時(shí)【4 】、日本叭加拿大f 6 】、等國(guó)家也陸續(xù)報(bào)道了輪狀病毒在家禽中的感染。國(guó)內(nèi)對(duì)輪狀病毒感染的報(bào)道較少，崔尚金【7 】、王廣蔭哪等進(jìn)行了部分研究．禽R V 屬于呼腸孤病毒科，輪狀病毒屬，無囊膜。在感染糞樣和細(xì)胞培養(yǎng)物中R V有兩種存在形式：一種是含完整外殼的實(shí)心光滑型( s 型) ：另一種是僅含內(nèi)殼的粗糙

4、型( R 型) 。只有含雙層衣殼的完整s 型病毒顆粒才具有感染性1 9 】。R V 對(duì)理化因素的作用有較強(qiáng)的抵抗力，糞便中的病毒在1 8 ～2 0 “ C 條件下。至少生存7 N 9 個(gè)月。耐乙醚、氯仿、反復(fù)凍融。超聲波處理以及3 7 “ C l h 仍不失活I(lǐng) ?，p H 3 ．5 ～1 0 ．0 范圍內(nèi)病毒仍保持感染力。雞R V 的基因組由1 1 個(gè)片段的雙股R N A 組成唧。聚丙烯酰胺凝膠電泳可見分子量由大到小依次排列的1 l

5、條帶，分為4 個(gè)區(qū)段，構(gòu)成特征性的R NA 電泳圖譜，稱之為電泳型( e l e c U ' o p h e r o t y p e ) ，可作為鑒定雞R V 的依據(jù)?J f l 2 l 【1 3 l 。禽A 群R V 為5 ：1 ：3 ：2 型，禽D 群和F 群R V 為5 ：2 ：2 ：2 型，禽G 群R V 為4 ：2 ：2 ：3 型。A 群R V 根據(jù)其1 0 、1 1 節(jié)段的遷移率差異，又可分為長(zhǎng)型( L 型) 和短型

6、( S 型) [ 1 4 1 。R V 的細(xì)胞培養(yǎng)較困難，曾一度使對(duì)R V 的研究停滯不前。據(jù)不同的研究表明，R V 的培養(yǎng)與以下三個(gè)因素直接相關(guān)：①敏感的細(xì)胞系。最常用的是M a r c l 4 5 和恒河猴胚腎傳代細(xì)胞系M A ．1 0 4 ' 1 5 l 【?。②接種前用胰酶處理㈣【l q 。在初代分離病毒或在細(xì)胞中連續(xù)傳代時(shí)，樣品應(yīng)用胰蛋白酶( 1 0 ～2 0 1 ．t g ／m 1 ) 處理且細(xì)胞維持液中應(yīng)含微量胰酶