豬流行性腹瀉病毒陜西株的分離鑒定及S基因的遺傳變異分析.pdf

1、豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)引起的一種高度接觸性腸道傳染病，發(fā)病特征為腹瀉、嘔吐、脫水，新生仔豬的死亡率高達(dá)100％，各種年齡豬和不同品系的豬群均易感。該病于1971年在歐洲首次被報(bào)道后，不久相繼在亞洲及南美相繼暴發(fā)，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。自2010年10月開始，PED在中國東南部10余

2、個(gè)養(yǎng)豬大省暴發(fā)并迅速波及到全國，呈現(xiàn)出高發(fā)病率、高死亡率的態(tài)勢(shì)，死亡仔豬超過100萬頭，給中國養(yǎng)豬業(yè)造成了沉重的打擊。近幾年P(guān)ED的流行范圍仍在不停的擴(kuò)大，成為嚴(yán)重危害中國養(yǎng)豬業(yè)的傳染病之一，直至目前仍沒有削減的趨勢(shì)。為進(jìn)一步了解豬流行性腹瀉病毒的流行特點(diǎn)及遺傳變異情況，加強(qiáng)對(duì)豬流行性腹瀉的防控，本研究對(duì)疑似PED的仔豬小腸和糞便樣品進(jìn)行了PEDV的分離與鑒定，并對(duì)分離到的毒株的S基因進(jìn)行了序列測定與遺傳變異分析，其主要結(jié)果如下:

3、>　　1.PEDV SX-YL株的分離與鑒定:將經(jīng)RT-PCR鑒定為PEDV陽性的病料樣品處理后，接種于Vero細(xì)胞，盲傳至8代時(shí)，部分細(xì)胞開始出現(xiàn)皺縮、變圓、顆粒物質(zhì)增多、折光性增強(qiáng)等CPE，對(duì)其進(jìn)行TCID50測定，TCID50為10-6.125/mL。為證明該病變是由PEDV所引起，采用RT-PCR對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行了PEDVN基因的擴(kuò)增，結(jié)果均為陽性。進(jìn)一步進(jìn)行了間接免疫熒光檢測(IFA)，結(jié)果表明，用PEDV陽性小鼠血清在PED

4、V感染24h后的Vero細(xì)胞中檢測到了病毒抗原的存在，可見到紅色熒光，而未被PEDV感染的Vero細(xì)胞，觀察不到熒光。最終確定該病毒為PEDV，將其命名為PEDV SX-YL株。
　　2.PEDV SX-YL株S基因的遺傳變異分析:對(duì)前面分離到的PEDV SX-YL株的S基因進(jìn)行測序，結(jié)果表明，該毒株S基因全長為4149bp，編碼1382個(gè)氨基酸，與歐洲經(jīng)典毒株CV777、韓國分離株DR13、歐洲近年流行株以及中國近年流行株的S基