豬流行性腹瀉病毒rSl蛋白親和肽的篩選與鑒定.pdf

1、豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemicdiarrhea virus，PEDV)引起的一種急性、高度接觸性腸道傳染病，豬流行性腹瀉病在各地區(qū)廣泛流行，造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。豬流行性腹瀉病毒的研究成為現(xiàn)今研究的熱點(diǎn)之一。豬流行性腹瀉主要以嚴(yán)重的嘔吐、脫水和腹瀉為特征，尤其對(duì)仔豬致病性最強(qiáng)。豬流行性腹瀉病毒S蛋白是重要的表面結(jié)構(gòu)蛋白，含有主要的抗原決定簇

2、和受體結(jié)合域，且具有較好的免疫原性。
　　 本研究對(duì)豬流行性腹瀉病毒S蛋白的免疫優(yōu)勢(shì)區(qū)和受體結(jié)合域進(jìn)行鑒定與生物淘選，為豬流行性腹瀉病毒診斷方法和新型疫苗的開發(fā)及抗病毒機(jī)制研究提供信息。
　　 本研究成功將擴(kuò)增的豬流行性腹瀉病毒rS1基因克隆到原核表達(dá)載體pGEX-6P-1上，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-6P-1-rS1，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，獲得了以包涵體形式表達(dá)的重組蛋白。以重組蛋白作為免疫原制備兔抗rS1抗體并進(jìn)行效價(jià)測(cè)定

3、及生物活性檢測(cè)。結(jié)果證實(shí)多抗效價(jià)達(dá)1∶65536，間接ELISA和Western-Blot實(shí)驗(yàn)證實(shí)此多抗可與rS1蛋白發(fā)生很好的抗原抗體反應(yīng)，說(shuō)明該多抗能夠用于rS1蛋白特異性檢測(cè)。
　　 進(jìn)一步的研究以豬流行性腹瀉病毒rS1重組蛋白為靶分子，通過噬菌體生物淘選，對(duì)其進(jìn)行了五輪噬菌體篩選。第四輪對(duì)表達(dá)載體pGEX-6P-1的標(biāo)簽蛋白GST進(jìn)行篩選，對(duì)第五輪洗脫物隨機(jī)淘選到的10個(gè)噬菌體進(jìn)行序列測(cè)定，最終共得到五種噬菌體序列，其中