豬流行性腹瀉病毒SC--P株生產(chǎn)用種用特性研究.pdf

1、豬流行性腹瀉病(PED)是由豬流行性腹瀉病毒(PEDV)引起的以水樣腹瀉、嘔吐為主要特征的傳染病，該病能夠感染所有年齡段豬只，死亡率居高不下。該病自上世紀(jì)70年代發(fā)現(xiàn)以來，就成為養(yǎng)豬業(yè)的一大難題，在短時(shí)間內(nèi)，給歐洲和亞洲的養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的損失，因此，對PEDV疫苗的開發(fā)變得尤為重要，而生產(chǎn)用種毒的特性研究則是疫苗研發(fā)的基礎(chǔ)。
　　本研究對實(shí)驗(yàn)室分離保存的PEDV-SC-P毒株在非洲綠猴傳代腎細(xì)胞(Vero)上進(jìn)行了傳代增殖培養(yǎng)，

2、按照《中國獸藥典》（2010版）和《中華人民共和國獸用生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（2001版）要求，對生產(chǎn)用Vero細(xì)胞進(jìn)行純凈性檢驗(yàn)，對PEDV-SC-P毒株的增殖特性、遺傳穩(wěn)定性、理化特性、純凈性、安全性、免疫原性、特異性和種毒最佳保存條件等進(jìn)行了檢測和研究，從而評估其作為疫苗種毒的開發(fā)前景和價(jià)值。通過純凈性檢驗(yàn)得出，生產(chǎn)用Vero細(xì)胞和PEDV種毒均純凈性高，無細(xì)菌、霉菌、支原體和外源病毒污染;增殖特性和遺傳穩(wěn)定性研究表明，PEDV種毒在

3、Vero細(xì)胞上連續(xù)傳代40次，均有穩(wěn)定細(xì)胞病變出現(xiàn)(CPE)，病毒在細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行增殖，在接毒36h后病毒含量達(dá)到高峰，且毒力穩(wěn)定，遺傳穩(wěn)定性高;理化特性研究表明，PEDV種毒株對氯仿和乙醚敏感，5-溴脫氧尿核苷(5-BUDR)對其核酸復(fù)制無抑制，符合有囊膜RNA病毒特征;PH3-7穩(wěn)定性較好，熱穩(wěn)定性不高，對55℃以上溫度敏感;對PEDV種毒的多代次檢測結(jié)果表明，各代次病毒含量均＞106PFU/mL，能與標(biāo)準(zhǔn)陽性血清發(fā)生特異性結(jié)合，毒種

4、特異;對仔豬接種，無不良反應(yīng)，安全性高;接種豬能抵御豬流行性腹瀉強(qiáng)毒Ea株的感染，發(fā)病情況和死亡情況均好于對照組，具有較好的免疫原性。對種毒保存條件及時(shí)間研究表明，基礎(chǔ)種毒凍干后在-20℃及以下溫度保存18個(gè)月仍符合病毒含量標(biāo)準(zhǔn);生產(chǎn)種子在濕毒狀態(tài)下，-20℃保存9個(gè)月仍符合病毒含量要求，-70℃至少可保存18個(gè)月。本研究結(jié)果表明，PEDV-SC-P毒株的各個(gè)方面均符合疫苗生產(chǎn)條件，具有疫苗研發(fā)價(jià)值。本研究為該毒株的疫苗研發(fā)提供了數(shù)據(jù)支