龍眼體細(xì)胞胚胎發(fā)生過程中的基因差別表達(dá).pdf

1、龍眼胚性愈傷組織的體細(xì)胞胚胎發(fā)生與合子胚的發(fā)育過程基本相同,依次經(jīng)過愈傷組織、球形胚、心形胚、魚雷胚、子葉胚以及成熟胚等階段.通過對2,4-D濃度及生長發(fā)育時間的控制獲得了高度同步化的各發(fā)育階段體胚材料.采用SDS法、CTAAB法、LiCl沉淀法均可從龍眼胚性培養(yǎng)物提取高質(zhì)量的DNA.LiCl沉淀法簡便、快捷、經(jīng)濟(jì)且提取的DNA較前兩者質(zhì)量更高,是適合用于胚性培養(yǎng)物DNA提取的一種方法.采用RNA抽提試劑盒提取的RNA適合的mRNA差別

2、顯示分析.堿基序列分析表明,longan1在3'端存在一個開放閱讀框(ORF),longan2、longan3分別在5'端存在一個開放閱讀框,longan1在3'方向,longan2、longan3在5'方向均沒有終止密碼子,所以可能往相應(yīng)的方向延伸仍為各自的ORF,因此可以通過RACE或者篩選cDNA文庫的辦法來獲得它們的全長cDNA.登陸Genbank進(jìn)行同源性比較發(fā)現(xiàn)longan2、longan3、longan4、longan4'

3、均沒有同源基因,而longan1與番茄a(bǔ)px基因具有較高的同源性(92﹪),推測longan1可能是龍眼體細(xì)胞胚胎中存在的apx基因.龍眼體細(xì)胞胚胎發(fā)生過程中不僅mRNA的種類和數(shù)量存在明顯變化,而且蛋白質(zhì)的種類和數(shù)量也存在顯著變化.采用蛋白質(zhì)水平雙向電泳技術(shù)研究龍眼體胚發(fā)生過程中的蛋白質(zhì)變化,獲得13個特異蛋白;分析發(fā)現(xiàn)這些特異蛋白的等電點(diǎn)與龍眼體細(xì)胞胚胎發(fā)育進(jìn)程相關(guān),隨著發(fā)育進(jìn)程的推進(jìn),特異蛋白的等電點(diǎn)呈降低趨勢.推測龍眼體胚的發(fā)育