家蠶卵黃和胚胎蛋白質組及其催青期變動的研究.pdf

1、浙江大學動物科學學院博士學位論文家蠶卵黃和胚胎蛋白質組及其催青期變動的研究姓名：顏新培申請學位級別：博士專業(yè)：特種經(jīng)濟動物飼養(yǎng)指導教師：徐孟奎;鐘伯雄20040501窒重塑墮塑壁墮堡魚墮望墨莖壁童塑壅墊墮塹塞中文摘要胚胎發(fā)育一直是生命科學研究的主題之一。家蠶是重要的模式實驗昆蟲，從一個受精卵發(fā)育成一個多細胞的個體，是許多基因在時間和空間上順序表達的結果。家蠶在催青期按預定區(qū)域分化形成頭、胸、腹及幼蟲各種組織器官，但引起這些形態(tài)特征變化的

2、基網(wǎng)功能并未解明。在后基因時代，功能基因組學成為研究的重點，蛋白質組是研究基因功能的重要方法，在目前家蠶胚胎發(fā)育機理尚未闡明的情況下，有必要開展家蠶催青期胚胎蛋白質組研究。本研究采劇l 削相化p H 梯度( i m m o b i l i z e dp Hg r a d i e n tI P G ) 雙向電泳分離技術和生物質譜分析等鑒定技術，結合蛋白質數(shù)據(jù)庫檢索系統(tǒng)，進行家蠶催青期功能蛋白質組的研究。探索家蠶成熟卵中卵黃蛋白的組成和在催

3、青期胚胎發(fā)育過程中的代謝變化：建立催青期各個發(fā)育階段胚胎蛋白質雙向電泳圖譜，比較各個胚胎之間的特異蛋白斑點，并進一步闡明有關蛋白質的功能。本研究首先從整體水平研究了家蠶成熟卵中卵黃蛋白的構成，從分子水平揭示家蠶卵黃蛋白在催青期胚胎發(fā)育中的變化。通過對家蠶成熟卵中卵黃蛋白雙向電泳圖譜的比較分析，發(fā)現(xiàn)家蠶卵黃蛋白凝膠圖像中能檢測到2 0 0 個左右蛋白斑點( 前人研究報道有三類卵黃蛋白) 。在本研究中卵黃磷蛋白( v i t e l l i

4、 n ，V n ) 、3 0 k D 蛋白和卵特異蛋白( E g gs p e c i f i cp r o t e i n ，E S P ) 二類高豐度蛋白占卵黃蛋白總量的6 5 ．5 ％，并且在分子質量標記為3 0 k D 區(qū)域有許多蛋白斑點，可能3 0 k D 存在著極為相似的多基因家族。對應于卵黃磷蛋白的4 2 k D 亞基的區(qū)域有1 0 個高含量蛋白連在一起，這種現(xiàn)象的產(chǎn)生可能是蛋白質后加工的不同或試樣調(diào)制時的影響，也可能是家

5、蠶體內(nèi)本身存在著極為相似的多基因家族。對多化性品種P 5 0 和二化性品種豐1 處女蛾卵的卵黃蛋白進行了品種間比較。P 5 0 和豐1 處女蛾卵的卵黃蛋白經(jīng)雙向電泳分離和銀染后，能夠檢測得到的蛋白斑點數(shù)分別為2 0 3 個和1 8 5 個．蛋白斑點匹配率為7 7 ．8 4 ％。卵黃磷蛋白、3 0 k D蛋白和卵特異蛋白三類高豐度蛋白含量也不相同。說明不同品種之問卵黃蛋白質存在著差異，暗示家蠶卵黃蛋白含量和種類與品種的化性、眠性、地理系統(tǒng)