20960.斜紋夜蛾幼蟲表皮對萊氏野村菌侵染的防御功能研究

1、斜紋夜蛾幼蟲表皮對萊氏野村菌侵染的防御功能研究重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文學(xué)生姓名：于海勇指導(dǎo)教師：殷幼平教授專業(yè)：生物學(xué)學(xué)科門類：理學(xué)重慶大學(xué)生物工程學(xué)院二O一一年四月重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要I摘要昆蟲病原真菌是自然界中害蟲種群的重要控制因素，體壁侵入是真菌感染昆蟲最主要的途徑。因此，除病原真菌本身的侵染能力外，昆蟲體壁的結(jié)構(gòu)及化學(xué)成分直接影響真菌侵染效率。菌株CQNr01是本實驗室從罹病斜紋夜蛾僵蟲上分離到的一株殺蟲真菌，前期的研究顯示

2、，該菌株對斜紋夜蛾低齡幼蟲有較好的殺蟲效果，但對高齡幼蟲侵染率較低。為了探索該菌株的開發(fā)應(yīng)用潛力，本課題在對該菌株的生物學(xué)特征、培養(yǎng)條件等進行研究的基礎(chǔ)上，以不同侵染方式處理斜紋夜蛾不同齡期幼蟲，對不同處理下CQNr01菌株對斜紋夜蛾不同齡期幼蟲的致病力差異、侵染過程及斜紋夜蛾不同齡期幼蟲的表皮脂類對CQNr01菌孢子的萌發(fā)影響等做了初步的研究，旨在探究斜紋夜蛾表皮在防御CQNr01菌株侵染中的防御功能及機理，明確病原真菌與斜紋夜蛾的相

3、互作用關(guān)系，為害蟲生物防治提供理論基礎(chǔ)。研究的主要結(jié)果如下：觀察了菌株的形態(tài)和生物學(xué)特征，結(jié)合ITS序列比對結(jié)果，確定該菌株的分類地位為萊氏野村菌（Nomuraeariley），并命名為菌株CQNr01。通過生物學(xué)研究確定了適宜菌株CQNr01生長的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為SDAY培養(yǎng)基，確定了適合其菌絲生長和產(chǎn)孢的最佳溫度為25℃，最適pH值為6.5；還對該菌株的胞外蛋白酶和幾丁質(zhì)酶產(chǎn)生能力做了研究發(fā)現(xiàn)該菌幾丁質(zhì)酶生產(chǎn)能力很差，而25℃時具有較強

4、的蛋白酶生產(chǎn)能力。采用孢子懸浮液浸泡和注射兩種方法測定了菌株CQNr01分生孢子對斜紋夜蛾2齡和4齡幼蟲的致病力差異。浸泡法處理斜紋夜蛾，1108孢子mL1濃度時2齡和4齡幼蟲的死亡率分別為89.98%和13.33%；同濃度的菌懸液進行注射處理，2齡和4齡幼蟲的死亡率則分別到達100%和88.89%。證明了高齡幼蟲體壁在防御CQNr01侵染中起著決定性的作用。制作不同齡期斜紋夜蛾幼蟲離體表皮并接種CQNr01孢子懸浮液，利用熒光顯微鏡觀

5、察和掃描電鏡觀察孢子萌發(fā)和侵染結(jié)構(gòu)產(chǎn)生情況。熒光觀察發(fā)現(xiàn)，菌株CQNr01的孢子能夠成功附著在斜紋夜蛾幼蟲的離體表皮上，但孢子在2齡幼蟲表皮的粘附能力優(yōu)于4齡幼蟲；接種24h起兩個齡期的離體表皮上均開始有孢子萌發(fā)現(xiàn)象并有附著胞和芽管產(chǎn)生，并隨著接種時間的增長芽管不斷伸長，但相同接種時間下孢子在2齡幼蟲表皮上萌發(fā)率和附著胞的產(chǎn)生數(shù)量明顯多于4齡幼蟲表皮。對接種24h和26h的2齡和4齡幼蟲體表進行了掃描電鏡的觀察，發(fā)現(xiàn)2齡幼蟲的表皮上24