耐多菌清真菌殺蟲(chóng)劑的研制——耐藥性萊氏野村菌的誘變育種.pdf

1、化學(xué)農(nóng)藥防治害蟲(chóng)盡管有很多優(yōu)點(diǎn)，但是大量使用化學(xué)農(nóng)藥后引發(fā)一系列的安全問(wèn)題，因此可克服這些問(wèn)題的防治方法—生物防治得到了更多研究者的關(guān)注。生物防治的方法有很多種，但是并不是每一種都適用于害蟲(chóng)防治中，昆蟲(chóng)病原真菌殺蟲(chóng)劑有很多優(yōu)點(diǎn)，比如，主動(dòng)感染寄主并且具有致死作用；循環(huán)侵染是其他微生物殺蟲(chóng)劑所沒(méi)有的一個(gè)特點(diǎn)；一般情況寄主不會(huì)產(chǎn)生抗性；因此國(guó)內(nèi)外都集中研究昆蟲(chóng)病原真菌殺蟲(chóng)劑。萊氏野村菌(Nomuraea rileyi，簡(jiǎn)稱(chēng)Nr，又稱(chēng)為萊氏蛾

2、霉)，在世界各地均有分布，是昆蟲(chóng)的重要病原真菌。該菌殺蟲(chóng)毒力強(qiáng)，寄主范圍廣，能寄生30多種鱗翅目害蟲(chóng)，特別是對(duì)鱗翅目夜蛾科類(lèi)的昆蟲(chóng)有著非常強(qiáng)的致病力，能在多種農(nóng)業(yè)系統(tǒng)中引發(fā)流行病，并且針對(duì)性非常強(qiáng)，對(duì)人體、其他非目標(biāo)昆蟲(chóng)包括寄生蟲(chóng)還有捕食者無(wú)毒害作用。多抗霉素是一種廣譜性抗生素類(lèi)殺菌劑，這種殺菌劑因其內(nèi)吸傳導(dǎo)特性和水溶特性，對(duì)作物的抗病效果良好，對(duì)環(huán)境影響卻很小，因此被廣泛使用。
　　目前，國(guó)內(nèi)外有關(guān)萊氏野村菌對(duì)抗生素類(lèi)殺菌劑的敏

3、感性還沒(méi)有系統(tǒng)詳細(xì)的報(bào)道，且很少有報(bào)道使用耐藥性萊氏野村菌進(jìn)行生物防治害蟲(chóng)。因此研究萊氏野村菌對(duì)抗生素的敏感性，并運(yùn)用各種脅迫方法產(chǎn)生耐藥性萊氏野村菌菌株，對(duì)于生物防治具有重要意義。本研究通過(guò)對(duì)10株萊氏野村菌菌株的室內(nèi)毒力測(cè)定， 篩選出對(duì)斜紋夜蛾具有高毒力的菌株，并對(duì)高毒力菌株進(jìn)行紫外誘變和含多抗霉素平板的脅迫，篩選出耐多抗霉素的萊氏野村菌菌株。為萊氏野村菌和多抗霉素復(fù)配制劑研究提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　1.本

4、研究通過(guò)使用10株供試萊氏野村菌菌株對(duì)斜紋夜蛾3齡幼蟲(chóng)致病毒力進(jìn)行測(cè)定，萊氏野村菌侵染后的僵蟲(chóng)先為白色，然后變?yōu)樯罹G色。感染致死初期，幼蟲(chóng)身體發(fā)僵、挺直或扭曲，發(fā)病后期幼蟲(chóng)出現(xiàn)吐水、下痢等癥狀。結(jié)果表明不同菌株的致病力存在差異，綜合比較僵蟲(chóng)率、校正死亡率以及致死中時(shí)間（LT50），其中以Nr19菌株的致病力最強(qiáng)，校正死亡率及僵蟲(chóng)率分別為100％和86.6%，致死中時(shí)間LT50為5.0501d；Nr16和Nr41緊跟其后，校正死亡率分別為

5、100%和93.2%，僵蟲(chóng)率分別為80.0%和85.7%，致死中時(shí)間LT50分別為3.9436d和4.2130d。以Nr16、Nr19、Nr41用于后續(xù)試驗(yàn)。
　　2.以篩選到的Nr16、Nr19、Nr41菌株為研究對(duì)象，根據(jù)對(duì)菌株適合致死率75%-85%，確定紫外誘變條件為:在孢子濃度為1x107個(gè)/mL時(shí)，采用30W紫外燈，照射距離為30cm時(shí)，Nr16、Nr19、Nr41照射時(shí)間分別為2.5min、4.0min、3.5min

6、。
　　采用菌絲生長(zhǎng)抑制率法測(cè)定了紫外誘變后的萊氏野村菌對(duì)多抗霉素的敏感性。發(fā)現(xiàn)不同誘變菌株萊氏野村菌對(duì)多抗霉素的敏感性存在一定的差異。誘變菌株Nr4101的EC50值最大，誘變株Nr1601的EC50值最小，分別為1.0540mg/mL和0.4377mg/mL。
　　3.根據(jù)多抗霉素在田間的施用濃度是1.67-2.50mg/mL。結(jié)合紫外誘變菌株的最小抑菌濃度。在含多抗霉素平板上，通過(guò)涂分生孢子法定向篩選萊氏野村菌耐多抗霉