納米聚乙烯亞胺載體介導(dǎo)質(zhì)粒在乳鼠心肌細(xì)胞中轉(zhuǎn)導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)研究

1、徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文納米聚乙烯亞胺載體介導(dǎo)質(zhì)粒在乳鼠心肌細(xì)胞中轉(zhuǎn)導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)研究姓名：姚建國申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（胸心外）指導(dǎo)教師：張中明20060501徐州醫(yī)學(xué)院胸心外科碩士研究生畢業(yè)論丈納米聚乙烯亞胺載體介導(dǎo)質(zhì)粒在乳鼠心肌細(xì)胞中轉(zhuǎn)導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)研究[中文摘要]目的：探討國產(chǎn)的869nm粒徑的聚乙烯亞胺(p01yethylenimine，PEI)載體對(duì)體外非分裂型乳鼠心肌細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率及其可能影響因素，測(cè)定納米PEI載體在乳鼠心

2、肌細(xì)胞中基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、最佳的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)條件和毒性作用。分析PEI納米載體的性能，進(jìn)一步的理解納米載體在心肌細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)中的理論意義，并探討其可能的應(yīng)用價(jià)值。方法：應(yīng)用裂解法擴(kuò)增含增強(qiáng)型綠色熒光蛋白DNA質(zhì)粒(enhancedgreenfluo—rescenceprotein，plEGFP)，Qiagn柱抽提純化質(zhì)粒；用ThemloMultiskanSpectrum測(cè)OD260、OD280值，按公式：質(zhì)粒樣品濃度=OD260稀釋倍數(shù)x50／

3、1000(gg／91)計(jì)算質(zhì)粒產(chǎn)量。采用低濃度胰蛋白酶消化法，分離新生Sprague—Dawiey(SD)大鼠心肌細(xì)胞，并進(jìn)行體外培養(yǎng)，利用心肌肌鈣蛋白I免疫細(xì)胞化學(xué)染色法測(cè)定心肌細(xì)胞純度。應(yīng)用不同劑量的PEI，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組：A組(2／ag)、B組(499)、C組(699)、D組(899)、E組(10pg)和G組(099)，分別結(jié)合等劑量plEGFP(299)，轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的乳FJ心肌細(xì)胞，F(xiàn)組(41ag)結(jié)合plEGFP(2btg)體外轉(zhuǎn)