c-Abl激酶在β2整合素介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的作用研究.pdf

1、白細(xì)胞沿著血管內(nèi)皮滾動(dòng)、穩(wěn)定粘附和跨內(nèi)皮遷移，最終到達(dá)炎癥部位是一個(gè)復(fù)雜的多步驟的過(guò)程，它的精確調(diào)控與機(jī)體的宿主防御和炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。有多種粘附分子參與這一事件，其中β2整合素主要介導(dǎo)白細(xì)胞穩(wěn)定粘附于血管內(nèi)皮上和跨內(nèi)皮的遷移。β2整合素是一類僅表達(dá)于白細(xì)胞表面的粘附分子家族，它包括四個(gè)成員，由一個(gè)共同的β亞基分別與四種α亞基形成非共價(jià)結(jié)合的異源二聚體。在靜息的白細(xì)胞中，β2整合素以一種低親和力和非粘附的狀態(tài)存在。在炎癥部位產(chǎn)生的細(xì)胞因

2、子和趨化因子的刺激下，β2整合素能夠迅速活化與其配體結(jié)合，這個(gè)過(guò)程為整合素的“inside—out”信號(hào)?；罨恼纤啬墚a(chǎn)生“outside—in”信號(hào)來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞的骨架變化以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。β2整合素的信號(hào)對(duì)于中性粒細(xì)胞的穩(wěn)定粘附和伸展非常關(guān)鍵，大量證據(jù)表明中性粒細(xì)胞的呼吸爆發(fā)、脫顆粒、蛋白的酪氨酸磷酸化等生理事件都依賴于β2整合素介導(dǎo)的細(xì)胞粘附。但是，對(duì)于中性粒細(xì)胞中β2整合素是如何調(diào)控細(xì)胞粘附的機(jī)制還不十分清楚。在中性粒細(xì)胞中，粘附引起

3、的β2整合素的交聯(lián)能夠活化多種非受體酪氨酸激酶，這些激酶與細(xì)胞的骨架重排、生長(zhǎng)、存活、運(yùn)動(dòng)密切相關(guān)。c—Abl激酶是一種非受體酪氨酸激酶，它參與多種受體引起的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，并且參與了F—肌動(dòng)蛋白依賴的細(xì)胞骨架變化。我們推測(cè)，c—Abl激酶可能參與了β2整合素介導(dǎo)的中性粒細(xì)胞粘附。本文主要探討了c—Abl激酶在中性粒細(xì)胞的β2整合素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的功能和作用機(jī)制。 我們的研究發(fā)現(xiàn)，在中性粒細(xì)胞中，β2整合素的交聯(lián)能夠增強(qiáng)c—Abl激酶的活

4、性。細(xì)胞因子TNF—α能夠引起細(xì)胞表面整合素表達(dá)的增加和活性的增強(qiáng)，但是c—Abl激酶抑制劑STI571并不影響這一變化，表明c—Abl激酶不參與TNF—α引起的整合素inside—out活化。而c—Abl激酶的抑制能顯著降低細(xì)胞的穩(wěn)定粘附和伸展，當(dāng)干涉胞內(nèi)的c—Abl激酶表達(dá)后也有相似的作用，因此c—Abl激酶主要參與了β2整合素的outside—in信號(hào)通路。 在靜息的中性粒細(xì)胞中，c—Abl激酶均勻的分布在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，而β2

5、整合素介導(dǎo)細(xì)胞粘附之后，c—Abl激酶就募集到β2整合素富集的部位。通過(guò)蛋白質(zhì)免疫沉淀和GSTpull—down等實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)在β2整合素交聯(lián)的中性粒細(xì)胞中，β2整合素與c—Abl激酶存在于同一個(gè)蛋白質(zhì)復(fù)合體中，但二者的結(jié)合不是直接的。talin是一類骨架蛋白，它的頭部與中性粒細(xì)胞中的β2整合素的胞漿尾部直接并持續(xù)地結(jié)合?；罨腸—Abl激酶通過(guò)其SH3結(jié)構(gòu)域與talin的頭部結(jié)合，進(jìn)而募集到β2整合素的胞漿尾部。 Vav是

6、一類鳥苷酸交換因子，它參與了β2整合素對(duì)中性粒細(xì)胞粘附的調(diào)控。我們的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在中性粒細(xì)胞中c—Abl激酶與Vav持續(xù)結(jié)合，并且在β2整合素產(chǎn)生的信號(hào)通路中c—Abl激酶能夠調(diào)節(jié)Vav的活性。二者的作用方式是通過(guò)c—Abl激酶的SH3結(jié)構(gòu)域與Vav的SH2結(jié)構(gòu)域的結(jié)合。通過(guò)點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)c—Abl激酶SH3結(jié)構(gòu)域中的134位酪氨酸對(duì)于二者的結(jié)合很關(guān)鍵。 我們的結(jié)果證明了，在β2整合素介導(dǎo)的中性粒細(xì)胞粘附過(guò)程中，c—Abl激