RGT肽抑制血小板整合素αⅡbβ3的外向內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子機(jī)制.pdf

1、整合素是一個(gè)細(xì)胞表面受體大家族，在細(xì)胞生物行為過程中起著重要作用，例如細(xì)胞粘附、遷移、分化、增殖和凋亡。血小板表面的整合素αⅡbβ3是整合素研究的典范，特別是其在雙向信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面。在正常的血液循環(huán)情況下，靜息的血小板的αⅡbβ3呈現(xiàn)非活化狀態(tài)，它對(duì)其配體纖維蛋白原的親和力低。激動(dòng)劑依賴的內(nèi)向外信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)使整合素αⅡbβ3從對(duì)配體低親和力狀態(tài)迅速轉(zhuǎn)變?yōu)楦哂H和力狀態(tài)。配體結(jié)合到整合素αⅡbβ3不僅形成了粘附連接而且啟動(dòng)了外向內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，外向內(nèi)

2、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與血小板的功能相關(guān)，包括血小板的穩(wěn)定粘附、伸展、血小板的二相聚集、分泌和血塊回縮。整合素αⅡbβ3是抗血栓藥物的靶點(diǎn)。整合素αⅡbβ3的拮抗劑依替巴肽、阿昔單抗、替羅非班通過阻斷其雙向信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)而起到抗血栓作用。但是目前整合素αⅡbβ3的拮抗劑易發(fā)生出血等副作用，這是由其阻斷了整合素αⅡbβ3的內(nèi)向外信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的同時(shí)阻斷了外向內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)所致。厘清整合素αⅡbβ3外向內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子機(jī)制有助于發(fā)展一個(gè)更好更安全的抗血栓的策略從而減少

3、或者避免出血和其它更嚴(yán)重的副作用。
　　整合素αⅡbβ3外向內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是由許多細(xì)胞內(nèi)蛋白和它的胞漿段尾部之間復(fù)雜而動(dòng)態(tài)的聯(lián)系介導(dǎo)的。Src是Src家族酪氨酸激酶中的一員，在血小板中含量豐富，并且有研究證明它的SH3結(jié)構(gòu)域直接地組成性結(jié)合于整合素β3 C端尾部，特別是最后的RGT序列，從而形成了Src-β3復(fù)合物，此復(fù)合物中可能還包含有其他細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)。小鼠和細(xì)胞模型中顯示Src與β3的相互作用在調(diào)節(jié)整合素αⅡbβ3外向內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中

4、發(fā)揮重要作用。缺乏SFKs(Src，Hck，F(xiàn)gr, Lyn)或含有整合素β3 T762A突變的小鼠呈現(xiàn)類似的表型，即在固相化纖維蛋白原上伸展不良為特點(diǎn)的外向內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的缺失，CHO細(xì)胞表達(dá)αⅡbβ3-△RGT時(shí)也可以觀察到類似的結(jié)果。最近，β3-△RGT敲入的小鼠證明缺失整合素β3尾部的RGT序列干擾了Src介導(dǎo)的整合素αⅡbβ3外向內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，并且降低了β3尾部的酪氨酸磷酸化水平。β3尾部的酪氨酸磷酸化是外向內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的重要分子事

5、件，與血小板功能如伸展和血塊回縮相關(guān)。整合素β3的747和759位的酪氨酸被苯丙氨酸替代的diYF小鼠呈現(xiàn)整合素αⅡbβ3外向內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)缺陷的表型，說明這兩個(gè)酪氨酸的磷酸化參與了外向內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的過程并起決定性的作用。不同的證據(jù)顯示Src調(diào)節(jié)整合素β3胞漿段Y747、Y759的磷酸化，但是Src在這一過程中的具體作用機(jī)制如其作為酪氨酸激酶是否能直接磷酸化這兩個(gè)酪氨酸則有待進(jìn)一步研究加以確定。
　　我們之前的工作顯示:一個(gè)模擬整合素β

6、3胞漿段尾部C端的穿膜肽，即十四烷基修飾的RGT，可通過與β3競(jìng)爭(zhēng)Src的SH3部分使Src與β3分離，從而阻止了外向內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。但是關(guān)于RGT如何調(diào)節(jié)血小板的功能的一些關(guān)鍵分子機(jī)制還不清楚。十四烷基修飾促使肽穿過細(xì)胞膜，但關(guān)于十四烷基修飾的肽進(jìn)入細(xì)胞后的定位還存在一些爭(zhēng)議。有些研究表明十四烷基修飾的肽在細(xì)胞生物功能方面的調(diào)節(jié)作用依賴于它錨定于細(xì)胞膜，而另外一些研究并不這樣認(rèn)為。RGT肽干擾Src-β3之間的作用是否依賴于十四烷基錨定于

7、膜上還不清楚。但這是個(gè)非常重要的問題，它可能決定了RGT肽或者其類似物的應(yīng)用模式。迄今為止，在臨床上還沒有小分子的藥物依賴錨定于細(xì)胞膜來發(fā)揮作用的例子。例如治療慢性髓性白血病的小分子藥物甲磺基伊馬替尼在腫瘤細(xì)胞的胞漿內(nèi)即以非膜靶定的方式抑制酪氨酸激酶的活性。在血小板中，大約3％的Src通過SH3部分結(jié)合至整合素β3尾部的RGT序列，同時(shí)胞漿中還有大量的Src未結(jié)合至整合素β3尾部。除了調(diào)節(jié)整合素αⅡbβ3的信號(hào)，Src還參與調(diào)節(jié)其他許多

8、的細(xì)胞功能。目前還不清楚進(jìn)入到血小板中的RGT肽結(jié)合至Src是否改變Src的重要功能包括激酶活性。
　　目前的研究中，我們應(yīng)用一個(gè)合成的穿膜肽myr-AC～CRGT，使它穿過細(xì)胞膜，在血小板胞質(zhì)內(nèi)釋放CRGT肽，從而觀察其在無法結(jié)合至膜的條件下對(duì)于整合素αⅡbβ3的外向內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和Src活性的影響。結(jié)果顯示CRGT肽抑制整合素αⅡbβ3外向內(nèi)的信號(hào)而并不依賴于錨定于血小板膜。值得注意的是，CRGT肽結(jié)合至Src并不影響Src的活性