bISG15在BIV潛伏感染中作用初探.pdf

1、潛伏感染是慢病毒逃脫宿主免疫監(jiān)視和免疫清除的重要機(jī)制。宿主通過(guò)先天免疫以及獲得性免疫抵抗外界病毒的感染。干擾素調(diào)節(jié)是先天免疫的重要組成部分,干擾素可以誘導(dǎo)一系列干擾素刺激基因的大量表達(dá)。干擾素刺激基因所編碼干擾素刺激蛋白的高水平表達(dá)可以抑制病毒的復(fù)制,這種抑制是導(dǎo)致慢病毒建立潛伏感染的原因之一。諸多外界因素可以影響慢病毒的感染狀態(tài),使慢病毒由潛伏感染轉(zhuǎn)向裂解感染。其中其他病毒與慢病毒的超感染便是影響因素之一,其他病毒的超感染往往可以促進(jìn)

2、慢病毒的復(fù)制。本研究以牛免疫缺陷病毒(BIV)為慢病毒模型,對(duì)一種干擾素刺激蛋白ISG15在BIV潛伏感染中的作用進(jìn)行了初步的探討。ISG15是一種可以被Ⅰ型干擾素誘導(dǎo)表達(dá)的小分子蛋白,屬于類(lèi)泛素修飾蛋白家族。與泛素類(lèi)似,ISG15可以共價(jià)地連接到一些蛋白上,進(jìn)行蛋白的翻譯后修飾,該修飾稱(chēng)之為蛋白質(zhì)的ISGylation修飾。ISG15以及ISGylation修飾參與多種重要的生物學(xué)過(guò)程,其中包括:先天免疫、腫瘤發(fā)生以及懷孕建立等。各種

3、屬間ISG15的氨基酸序列同源性并不高。目前,對(duì)于牛ISG15(bovineISG5,bISG15)的研究主要集中于其在母牛懷孕的建立方面,而bISG15在先天免疫以及抗病毒方面的研究基本上是空白。我們首先建立了bISG15的相關(guān)檢測(cè)體系,包括bISG15的體外啟動(dòng)子Luciferase報(bào)告系統(tǒng)、bISG15 mRNA的RT-PCR檢測(cè)系統(tǒng)以及bISG15表達(dá)的Western-blot檢測(cè)系統(tǒng)等。在此基礎(chǔ)上,對(duì)bISG15在胎牛肺細(xì)胞(

4、FBLs一種BIV的飼養(yǎng)細(xì)胞)中的表達(dá)、BIV與bISG15的相互影響(包括BIV感染對(duì)bISG15表達(dá)水平的影響、blSG15對(duì)BIV復(fù)制的抑制、BIV調(diào)控蛋白bTat對(duì)bISG15抑制的抵抗等)進(jìn)行了初步的研究。最后,我們研究了RNA病毒牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)和DNA病毒牛皰疹病毒Ⅰ型(BHV-1)對(duì)bISG15表達(dá)的影響,并對(duì)其分子機(jī)制進(jìn)行了初步探討。本文獲得了以下重要結(jié)果及結(jié)論:1.通過(guò)RT-PCR以及Western-bl

5、ot檢測(cè)系統(tǒng)證實(shí),FBLs中bISG15本底表達(dá)水平不高,但通過(guò)poly I:C或LPS刺激可以引起bISG15表達(dá)水平的上調(diào):2.通過(guò)免疫熒光以及染色體免疫沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí),FBLs中bISG15表達(dá)水平的上調(diào)與干擾素調(diào)節(jié)因子3(IRF-3)密切相關(guān),并通過(guò)體外轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)證明IRF-3過(guò)表達(dá)可以激活bISG15的啟動(dòng)子;3.BIV感染FBLs,可以引起bISG15的少量上調(diào),而隨感染進(jìn)行bISG15的增加表達(dá)水平逐漸下降;4.bISG15參