PcG蛋白HPC2在HPV16感染的宮頸癌細(xì)胞中調(diào)控作用初探.pdf

1、目的：1、檢測siha細(xì)胞中是否有HPV16E7基因和HPC2基因表達(dá)；2、通過siRNA干擾技術(shù)對siha細(xì)胞中E7基因和HPC2基因進(jìn)行沉默，觀察HPV16 E7基因與HPC2基因兩者之間的關(guān)系；3、觀察HPC2基因沉默后對siha細(xì)胞增殖、凋亡方面的影響。初步探索HPC2基因在HPV16感染的宮頸癌發(fā)病機(jī)制中與E7基因之間的聯(lián)系以及HPC2在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中可能的機(jī)制。
　　方法：1、體外培養(yǎng)HPV16感染的宮頸癌細(xì)胞（si

2、ha細(xì)胞）；2、應(yīng)用RT-PCR檢測siha細(xì)胞中是否存在E7基因和HPC2基因；3、設(shè)計(jì)siRNA干擾序列，在siha細(xì)胞中分別沉默E7基因和HPC2基因；4、應(yīng)用RT-PCR和Q-PCR技術(shù)檢測siRNA干擾片段對siha細(xì)胞中目的基因的沉默效率；5、應(yīng)用Q-PCR技術(shù)檢測沉默E7基因后的siha細(xì)胞株中HPC2基因表達(dá)情況；6、應(yīng)用Western-blot檢測沉默E7基因后siha細(xì)胞中HPC2蛋白的表達(dá)情況；7、應(yīng)用CCK8檢測

3、HPC2基因沉默后siha細(xì)胞的增殖情況；8、應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測HPC2基因沉默后siha細(xì)胞的凋亡情況。
　　結(jié)果：1、HPV16感染的siha細(xì)胞中存在HPVE7基因和HPC2基因；2、通過siRNA干擾技術(shù)能有效沉默siha細(xì)胞中E7基因（抑制效率：67％左右）和HPC2基因（抑制效率：70%左右）；3、E7基因沉默后的siha細(xì)胞中HPC2在mRNA水平和蛋白水平均下調(diào)；4、CCK8試驗(yàn)結(jié)果顯示：HPC2基因被沉默后si

4、ha細(xì)胞增殖下調(diào)，與E7基因沉默后對siha細(xì)胞增殖的影響相似；5、細(xì)胞凋亡檢測結(jié)果顯示：HPC2基因沉默后細(xì)胞凋亡比例增加，與E7基因沉默后對siha細(xì)胞凋亡的影響相似。
　　結(jié)論：1、siha細(xì)胞中有HPC2基因和E7基因表達(dá)；2、siRNA干擾技術(shù)可以有效抑制目的基因的表達(dá)；3、E7基因可調(diào)控HPC2基因的表達(dá)；4、HPC2在siha細(xì)胞中參與了增殖、凋亡的調(diào)控；5、HPC2對細(xì)胞增殖、凋亡的調(diào)控可能是HPV16感染細(xì)胞后導(dǎo)