PcG蛋白HPC2的生物信息學(xué)分析及其在不同HPV感染狀態(tài)的宮頸癌細(xì)胞中的表達(dá)研究.pdf

1、目的:宮頸癌是全球女性惡性腫瘤中的常見疾病，嚴(yán)重威脅著女性的生命健康。作為發(fā)展中國家的中國每年的新發(fā)病例占世界總新發(fā)病例的30％左右，且宮頸癌患者以每年2％-3％的速度增長。近年來多個(gè)宮頸癌普查顯示發(fā)病年齡趨于年輕化?，F(xiàn)已有大量的研究表明HPV感染特別是高危型HPV病毒的感染是絕大多數(shù)宮頸癌癌前病變和宮頸癌的主要原因。而HPV16與HPV18在致宮頸癌的高危型HPV中最常見。多梳基因(Polycomb group，PcG)是近年來新發(fā)現(xiàn)

2、的一個(gè)腫瘤相關(guān)基因。其已被證實(shí)為發(fā)育時(shí)維持同源異形基因穩(wěn)定表現(xiàn)的重要因子，在胚胎發(fā)育、腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移以及干細(xì)胞的維持中有著重要的作用?，F(xiàn)已有多項(xiàng)研究表明PcG是一種腫瘤相關(guān)基因，參與鼻咽癌、乳腺癌、肺癌、膀胱癌等多種人類腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。HPC2屬于PcG基因家族成員，在多種癌組織中有大量表達(dá)。研究證實(shí)PcG蛋白HPC2在誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡、調(diào)控細(xì)胞生長等方面的作用，并有研究表明HPC2在宮頸癌中的表達(dá)較正常宮頸組織明顯增高，但其在宮頸癌組

3、織中的表達(dá)及作用途徑仍不明晰，需要進(jìn)一步研究證實(shí)。因此深入了解與深入研究PcG蛋白HPC2的生物信息學(xué)功能及其與宮頸癌的關(guān)系很有必要，希望能為宮頸癌的發(fā)病機(jī)制的研究提供新的方向。本實(shí)驗(yàn)先通過生物信息學(xué)方法，對(duì)HPC2蛋白的氨基酸序列進(jìn)行理化性質(zhì)分析、親/疏水性分析、細(xì)胞內(nèi)的定位情況、結(jié)構(gòu)域分析，并對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)演化關(guān)系預(yù)測，為日后開展HPC2的相關(guān)研究提供理論依據(jù)。后通過體外培養(yǎng)不同HPV感染狀態(tài)的宮頸癌細(xì)胞Siha(HPV16感染)，H

4、eLa(HPV18感染)，C-33a（無HPV感染），探討PcG蛋白HPC2在3種宮頸癌細(xì)胞中的表達(dá)情況，并比較PcG蛋白HPC2在不同HPV感染狀態(tài)的宮頸癌細(xì)胞中的表達(dá)是否存在差異，旨在為HPV致宮頸癌的作用機(jī)制提供一個(gè)新的研究方向。
　　方法:1.體外培養(yǎng)三種宮頸癌細(xì)胞株;2.采用熒光定量RT-PCR，觀察不同HPV感染狀態(tài)的宮頸癌細(xì)胞中HPC2基因的表達(dá)情況。比較Siha，HeLa，C-33a細(xì)胞中HPC2的表達(dá)有無差異;3

5、.采用western blot技術(shù)，比較Siha，Hela，C-33a宮頸癌細(xì)胞中PcG蛋白HPC2的表達(dá)是否存在差異。
　　結(jié)果:1.熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示:不同HPV感染狀態(tài)下的宮頸癌細(xì)胞均有HPC2基因的表達(dá)。Hela、Siha細(xì)胞中的HPC2基因的表達(dá)較C-33a細(xì)胞明顯下調(diào)，P值均小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Hela與Siha細(xì)胞間HPC2基因的表達(dá)無明顯差異，P=0.318＞0.05。2.Western Blot