大鯢β-defensin基因的生物信息學(xué)分析和表達(dá)特性研究.pdf

1、β-defensin是一種結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，抗菌抗病毒活性強(qiáng)，具備多種生物學(xué)活性的小分子多肽。本研究對(duì)來自于大鯢皮膚轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中的大鯢β-defensin基因進(jìn)行了鑒定和結(jié)構(gòu)分析;采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測了大鯢β-defensin基因在不同組織、不同發(fā)育階段以及細(xì)菌和病毒感染情況下的表達(dá)特性和變化;并對(duì)大鯢β-defensin基因進(jìn)行了重組原核表達(dá)載體的構(gòu)建和重組蛋白活性的檢測。獲得如下結(jié)果:
　　1.大鯢β-defensin基因全長

2、eDNA為771bp，其中5'非編碼區(qū)為90bp，3'非編碼區(qū)為531 bp，開放閱讀框150bp，共編碼49個(gè)氨基酸，編碼的蛋白質(zhì)分子量為5.52 kD，等電點(diǎn)為9.23，在pH等于7的溶液中的電荷為5.87，無信號(hào)肽，為內(nèi)源性抗菌肽?；诎被嵝蛄械耐淳垲愱P(guān)系表明，其和兩棲動(dòng)物親緣關(guān)系最近。
　　2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR表明，大鯢在皮膚中表達(dá)量最高，且在幼體時(shí)即大量表達(dá)。細(xì)菌和病毒感染會(huì)顯著上調(diào)大鯢β-defensin基因的表

3、達(dá)，其中細(xì)菌感染后大鯢β-defensin基因在24小時(shí)達(dá)到峰值，而病毒感染后則在120小時(shí)達(dá)到峰值。
　　3.構(gòu)建獲得的大鯢重組表達(dá)載體pET32a(+)-AdBD經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，獲得了大鯢重組β-防御素蛋白，純化后的重組蛋白對(duì)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性均有殺滅效果，其中對(duì)革蘭氏陰性菌中的溶藻弧菌、大腸桿菌和哈維氏菌最有效，最小抑菌濃度僅為19μg/mL。
　　以上結(jié)果表明大鯢-defensin基因是大鯢皮膚主要免疫效應(yīng)基因