miR-21在HPV16感染的宮頸鱗狀上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中作用的研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文miR-21在HPV16感染的宮頸鱗狀上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中作用的研究姓名：姚婷婷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：林仲秋20100602中山大學(xué)博士學(xué)位論文 中文摘要腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。值得注意的是，m i R - 2 1 位于染色體脆弱區(qū)域F R A l 7 B ，而這正是H P V l 6 整合于人染色體1 7 q 2 3 ．2 的區(qū)域。H P V 整合到人細(xì)胞基因組可引起基因改變，如缺

2、失、擴(kuò)增或重組，和表觀遺傳改變。因此我們推測(cè)在H P V 整合部位附近的m i R ．2 1 可能對(duì)宮頸鱗癌的發(fā)生和發(fā)展有重要作用。盡管腫瘤相關(guān)m i R N A 的發(fā)現(xiàn)及其功能的分析已然成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)之一，然而在宮頸腫瘤中，特別是以宮頸鱗癌為代表的盆腔鱗狀細(xì)胞癌的相關(guān)m i R N A及其功能的研究罕見報(bào)道。從宮頸上皮內(nèi)瘤變( C e r v i c a l I n t r a e p i t h e l i a lN e o p

3、l a s i a ，C r N ) 發(fā)展到宮頸鱗癌( C e r v i c a lS q u a m o u s C e l lC a r c i n o m a , S C C ) 是一個(gè)較長(zhǎng)的過程，而一旦宮頸鱗癌進(jìn)展到晚期階段，治療往往就棘手了。因此早發(fā)現(xiàn)高危型H P V 感染、早治療C I N 患者、早診斷宮頸癌患者，是當(dāng)前醫(yī)學(xué)預(yù)防和研究的重點(diǎn)之一。鑒于此，本研究首先采用實(shí)時(shí)定量I H ．P C R ( q u a n t i

4、 t a t i v e r e a l ．t i m e P C R ，q R T ．P C R ) 和n o r t h e r n b l o t 技術(shù)，通過與正常宮頸組織對(duì)比，觀察C I N 和S C C 的組織和細(xì)胞中m i R ．2 1 的表達(dá)水平；隨后在石蠟切片中開展原位雜交檢測(cè)，觀察成熟m i R - 2 1 的分布，分析m i R ．2 1 的表達(dá)與宮頸鱗癌患者的臨床病理因素的相關(guān)性。在此基礎(chǔ)上，建立體外培養(yǎng)宮頸鱗癌的

5、細(xì)胞模型，通過轉(zhuǎn)染m i R ．2 1 拮抗物，觀察細(xì)胞增殖、凋亡和遷移能力的改變，進(jìn)而在裸鼠體內(nèi)觀察轉(zhuǎn)染后宮頸鱗癌細(xì)胞成瘤能力的改變。為深入探討上述作用機(jī)制，我們通過e D N A 芯片結(jié)合靶基因預(yù)測(cè)軟件，篩選出了m i R ．2 1 可能的靶基因C C L 2 0 ，并且通過熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)技術(shù)加以驗(yàn)證，從而為闡明m i R ．2 1 在高危型H P V l 6 感染的宮頸鱗狀上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中的作用提供線索，為研制靶向?qū)m頸

6、鱗癌細(xì)胞的m i R N A 或其靶基因的新型基因藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。第一部分m i R - 2 1 在H P V l 6 感染的宮頸鱗狀上皮病變細(xì)胞中的表達(dá)研究目的：最近研究報(bào)道顯示m i R - 2 1 在多種實(shí)體瘤中表達(dá)量增高，但關(guān)于m i R ．2 l 在宮頸鱗狀上皮不同病變階段中的研究尚無報(bào)道。本部分旨在通過觀察m i R - 2 1 在宮頸鱗狀上皮惡變過程的不同階段的表達(dá)情況，從而為宮頸鱗癌的治療和預(yù)防提供新的思路。¨