生姜總姜酚和總黃酮的制備及對PC12細(xì)胞擬腦缺血模型的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：提取分離生姜總姜酚、總黃酮，并對其進(jìn)行含量測定以及PC12細(xì)胞的損傷抑制研究，為生姜抗腦缺血有效部位的深入研究奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1.采用75％乙醇，按1∶3(m∶v)比例對生姜中的主要成分進(jìn)行提取。提取物以甲醇溶解除雜，濃縮甲醇溶出物得浸膏。以聚酰胺為柱層析材料，以不同濃度乙醇-水溶液為洗脫劑，對生姜浸膏進(jìn)行分離。采用硅膠G板，以石油醚-乙酸乙酯(7∶3)為展開劑，5％鹽酸酸性三氯化鐵乙醇溶液和三氯化

2、鋁乙醇溶液為顯色劑進(jìn)行薄層(TLC)檢測，50％乙醇洗脫部分為姜酚類化合物，減壓蒸干得總姜酚干膏；95％乙醇洗脫部分減壓蒸干得總黃酮干膏，并用紫外分光光度法對生姜總黃酮進(jìn)行含量測定。
　　 以石油醚-乙酸乙酯(7∶3)為洗脫劑，以硅膠為柱層析填料對總姜酚進(jìn)行粗分；以6-姜酚、8-姜酚為對照品，分別吸取洗脫液5-10μl，點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯(7∶3)、氯仿-甲醇(9∶0.5)為展開劑，5％鹽酸酸性三氯化鐵乙醇溶

3、液顯色；根據(jù)TLC檢測結(jié)果合并洗脫液，濃縮蒸干。
　　 采用制備型高效液相(Prep-HPLC)，色譜條件：C18ODBTM10um色譜柱(30mm×150mm)；流量15ml/min；檢測波長：280nm、370nm；進(jìn)樣量3-5ml；流動(dòng)相：甲醇-水(65∶35)，對總黃酮進(jìn)行分離純化得到單體化合物。
　　 2.采用H2O2造成PC12細(xì)胞損傷模型，通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)，MTT法測定了解PC12細(xì)胞損傷情況和

4、存活率，研究6-姜酚、8-姜酚、總姜酚、總黃酮和對照品的細(xì)胞保護(hù)作用；
　　 結(jié)果：
　　 1.共提取生姜27.06 kg，得生姜75％乙醇提取物干膏0.8kg，提取率為2.96％。取500g生姜75％乙醇提取物，分離得到總姜酚126.0g，得率為25.2％。從總姜酚分離出6-姜酚，8-姜酚兩個(gè)單體化合物。
　　 以蘆丁為對照品，測得生姜總黃酮提取物中黃酮類化合物含量為12.86％，加樣回收實(shí)驗(yàn)RSD值為1.86

5、％。分離得生姜黃酮I(929.5mg)，化合物2(40.6mg)。以生姜黃酮I為對照品，以高效液相色譜法測得生姜總黃酮中黃酮I的含量為0.79％。
　　 2.與損傷組比較，6-姜酚1μM、10μM；總姜酚10μM；總黃酮(0.01-0.5μg/L)可明顯提高A570OD值，顯著提高PC12細(xì)胞生存率(P＜0.05 or P＜0.01)。8-姜酚的A570OD值與損傷組比較無顯著差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：