冬凌草總黃酮對大、小鼠腦缺血耐受模型的干預(yù)作用研究.pdf

1、目的：通過大、小鼠腦缺血耐受模型來研究冬凌草總黃酮對腦缺血耐受模型的保護(hù)作用，并通過測定血清中神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE），炎癥細(xì)胞因子一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-8，細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白B細(xì)胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）及其相關(guān)X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）含量；觀察核轉(zhuǎn)錄因子NF-κBp65及神經(jīng)營養(yǎng)因子GDNF、BDNF的表達(dá)情況；計(jì)算腦梗死面積

2、，觀察腦組織形態(tài)學(xué)變化等，從而探討冬凌草總黃酮對腦缺血耐受模型的保護(hù)作用。
　　方法：采用阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈血流10min，恢復(fù)灌注120h后，再次阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈30min，再灌注22h的方法，復(fù)制小鼠腦缺血耐受模型。預(yù)處理組小鼠短暫缺血10min后，尼莫地平組、腦絡(luò)通膠囊組、冬凌草總黃酮各劑量（300 mg/kg、150 mg/kg、75mg/kg）組分別給予相應(yīng)的藥物灌胃，假手術(shù)組、缺血再灌注損傷組、BIT模型組灌服同體積0.

3、5％羧甲基纖維素鈉（CMC）,每天1次，連續(xù)給藥5天，造模后第5天（120h）給藥1h后，除假手術(shù)組外，其余各組小鼠分別阻斷血流30min，再灌注22h，取血清檢測血清中NSE水平，取腦測定組織腦中NO含量及NOS活力的變化，觀察腦組織病理形態(tài)學(xué)變化。
　　采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈短暫阻斷10min作為預(yù)處理時(shí)間，恢復(fù)灌注72h后，采用線栓法阻塞左側(cè)大腦中動(dòng)脈2h，再灌注22h的方法（2VO+MCAO），復(fù)制大鼠腦缺血耐受模型。預(yù)處理各組

4、大鼠短暫缺血10min后，尼莫地平組、腦絡(luò)通膠囊組、冬凌草總黃酮各劑量（200 mg/kg、100 mg/kg、50mg/kg）組分別給予相應(yīng)的藥物灌胃，假手術(shù)組、缺血再灌注損傷組、BIT模型組灌服同體積0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC）,每天1次，連續(xù)給藥3天，給藥1h后，除假手術(shù)組外，其余各組大鼠進(jìn)行MCAO手術(shù)，再灌注22h后，評估大鼠神經(jīng)功能缺失，測血清中NSE水平，腦組織TTC染色計(jì)算梗死面積，測定腦勻漿中TNF-α、IL-1β

5、、IL-8、Bcl-2、Bax、Casp-3的含量，常規(guī)HE染色觀察腦組織病理形態(tài)學(xué)變化，免疫組化法觀察GDNF、BDNF、NF-κBp65蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：小鼠腦缺血耐受模型及大鼠腦缺血耐受模型復(fù)制成功。冬凌草總黃酮能降低大、小鼠死亡率，顯著降低大鼠神經(jīng)功能缺失評分，減少大鼠腦梗死面積，降低大、小鼠血清中NSE水平，提高小鼠腦組織中NO含量及NOS活力；升高大鼠腦組織中TNF-α、IL-1β、Bcl-2含量，降低IL-8

6、、Bax、Casp-3含量，促進(jìn)神經(jīng)營養(yǎng)因子GDNF、BDNF蛋白表達(dá)，抑制NF-κBp65蛋白表達(dá)；改善大、小鼠腦組織皮質(zhì)及海馬區(qū)的病理損傷情況。
　　結(jié)論：冬凌草總黃酮通過誘導(dǎo)產(chǎn)生低濃度的細(xì)胞因子NO、NOS、TNF-α、IL-1β刺激機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)源性的保護(hù)機(jī)制，提高神經(jīng)元的抗損傷能力；升高腦組織中Bcl-2蛋白含量，降低Bcl-2相關(guān)蛋白Bax含量，抑制NF-κBp65蛋白表達(dá)，抑制半胱氨酸蛋白酶3（Casp-3）活性，抑制神