谷氨酰胺及丹酚酸B對PC12細(xì)胞缺糖損傷的保護(hù)作用及機(jī)制.pdf

1、心腦血管疾病是對人類健康威脅最大的疾病之一。在此類疾病中又以缺血性腦血管病最為常見。了解神經(jīng)細(xì)胞在體內(nèi)缺血、缺氧損傷過程中細(xì)胞水平、亞細(xì)胞水平及分子水平的變化將極大補(bǔ)充我們對缺血損傷的病理機(jī)制的了解并為探求有效的治療方法提供新的思路。 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC12)是常用的神經(jīng)生物和神經(jīng)化學(xué)研究的細(xì)胞模型。本文以PC12細(xì)胞(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞)的無糖培養(yǎng)建立缺糖損傷模型，應(yīng)用形態(tài)學(xué)方法觀察PC12細(xì)胞在缺糖損傷過程

2、中的變化；MTT法檢測細(xì)胞的存活率；應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測亞二倍體細(xì)胞的比率及線粒體跨膜電位的改變，從細(xì)胞形態(tài)到功能等多方面研究谷氨酰酰胺、丹酚酸B、“鹿1”、“鹿2”等多種藥物成份對PC12細(xì)胞缺糖損傷的作用。 腦缺血也會引起熱休克基因(hsp)在腦神經(jīng)元中的上調(diào)表達(dá)。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白75(grp75)基因是hsp70家族的一個重要成員，在缺血時細(xì)胞內(nèi)grp75上調(diào)表達(dá)是對特定應(yīng)激的靈敏特異的應(yīng)答方式。本文還從grp75的表達(dá)為思路

3、探討谷氨酰胺、丹參組份等中藥的作用機(jī)制。應(yīng)用了RT-PCR、蛋白印跡雜交、免疫細(xì)胞化學(xué)、原位雜交等方法研究grp75的表達(dá)變化，對其保護(hù)的機(jī)制進(jìn)行探討。谷氨酰胺作用組與無糖對照組相比，Grp75在蛋白質(zhì)水平、mRNA表達(dá)水平檢測都有明顯的上調(diào)表達(dá)，而丹酚酸作用組未顯示有上調(diào)grp75表達(dá)的作用。 激光共聚焦顯微鏡，又稱為細(xì)胞CT，可對細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)進(jìn)行定量、定性觀察，和細(xì)胞內(nèi)一些離子定量檢測。細(xì)胞在缺糖時，Ca2+大量內(nèi)流，加劇細(xì)