通用效應(yīng)因子tTF-SA選擇性誘發(fā)腫瘤組織血管栓塞.pdf

1、選擇性誘發(fā)腫瘤組織血管血栓性栓塞從而導(dǎo)致腫瘤組織的缺血性壞死是一種很有前景的抗腫瘤策略。tTF融合蛋白利用導(dǎo)向載體將截短的組織因子tTF選擇性地定位于腫瘤組織血管，可以誘發(fā)腫瘤組織血管栓塞，阻斷腫瘤營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的供給，引發(fā)腫瘤缺血性壞死，發(fā)揮抗腫瘤作用。由于腫瘤組織單一靶點(diǎn)數(shù)量的有限性及表達(dá)的異質(zhì)性，現(xiàn)使用單載體介導(dǎo)的腫瘤血管靶向治療效果并不理想，多靶點(diǎn)聯(lián)合治療是克服這一缺點(diǎn)的有效策略。我們設(shè)想以生物素-親和素體系作為載體與效應(yīng)因子t

2、TF的橋聯(lián)系統(tǒng)，利用基因工程技術(shù)構(gòu)建tTF與SA的融合蛋白作為通用效應(yīng)因子，并與生物素化的腫瘤血管靶向載體聯(lián)合應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)多靶點(diǎn)的腫瘤組織血管靶向治療。 為了制備靶向通用效應(yīng)因子tTF/SA融合蛋白，我們利用PCR技術(shù)分別克隆與合成截短組織因子tTF和鏈霉親和素SA的基因，重組tTF與SA的融合基因，并克隆至表達(dá)載體pET22b(+)，在E.coliBL21(DE3)中表達(dá)，鎳親和層析柱純化tTF/SA融合蛋白。結(jié)果表明，我們獲得

3、了序列正確的tTF/SA/pET22b(+)重組子，融合基因在E.coliBL21(DE3)中獲得高效表達(dá)。凝血實(shí)驗(yàn)和FX活化實(shí)驗(yàn)證實(shí)，純化后的融合蛋白具有活化FX和引起血液凝固的能力；ELISA實(shí)驗(yàn)證實(shí)，融合蛋白能與生物素或生物素化的載體結(jié)合。 為了證實(shí)通用效應(yīng)因子和生物素化載體的聯(lián)合治療的有效性，我們通過碳二亞胺交聯(lián)法分別制備整合素配體(RGD)3多肽和單鏈抗核抗體M7與生物素的交聯(lián)物，治療人胃癌MGC803腫瘤動物模型。生

4、物素化的載體(RGD)3和M7單獨(dú)或聯(lián)合注射后，再分別注射tTF/SA融合蛋白，連續(xù)給藥5天。結(jié)果顯示tTF/SA：M7-B組的抑瘤率為43.9％、tTF/SA：(RGD)3-B組的抑瘤率為27.7％、tTF/SA：[M7+(RGD)3]-B組的抑瘤率為59％。免疫組化結(jié)果顯示，(RGD)t3-B能選擇性定位于新生的腫瘤血管，M7-B能選擇性定位于變性和壞死的腫瘤細(xì)胞；病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，通用效應(yīng)因子在生物素化靶向載體介導(dǎo)下能有效地誘發(fā)腫瘤

5、組織血管栓塞，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞變性壞死；而對正常組織細(xì)胞沒有毒副作用。 總之，利用基因工程技術(shù)表達(dá)的tTF/SA融合蛋白保持了組分tTF和SA的活性。在腫瘤動物模型治療實(shí)驗(yàn)中，tTF/SA融合蛋白可以作為通用效應(yīng)因子與生物素化載體(RGD)3-B或M7-B或(RGD)3-B+M7-B使用，并有效地誘發(fā)腫瘤組織血管血栓性栓塞、進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤組織細(xì)胞缺血壞死和抑制腫瘤生長。本研究證明tTF/SA通用效應(yīng)因子與多種生物素化載體聯(lián)合使用可以實(shí)